ampD基因突變對(duì)AmpC β-內(nèi)酰胺酶由野生型向持續(xù)高產(chǎn)型轉(zhuǎn)變作用的研究及泛耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌耐藥性的同源性初步分析.pdf

1、第一部分ampD基因突變對(duì)AmpCβ-內(nèi)酰胺酶由野生型向持續(xù)高產(chǎn)型轉(zhuǎn)變作用的研究
　　第一部分
　　目的:了解我院老年患者醫(yī)院感染前5位常見革蘭陰性桿菌的產(chǎn)酶類型，為指導(dǎo)臨床合理選用抗菌藥物提供依據(jù)，進(jìn)一步探討陰溝腸桿菌ampD基因突變對(duì)持續(xù)高產(chǎn)型AmpC beta-內(nèi)酰胺酶（簡(jiǎn)稱AmpC酶）的調(diào)控機(jī)制。
　　方法:收集2011年9月-2012年8月分離自華東醫(yī)院感染患者的前5位常見的頭孢西丁耐藥的革蘭陰性菌，用改良的

2、三維試驗(yàn)檢測(cè)的革蘭陰性桿菌的產(chǎn)酶類型，對(duì)分離到的4株產(chǎn)持續(xù)高產(chǎn)型AmpC酶的陰溝腸桿菌，運(yùn)用T載體和pMW219質(zhì)粒分別對(duì)ampD基因進(jìn)行測(cè)序、比對(duì)、分析，并驗(yàn)證其基因突變與AmpC酶持續(xù)高產(chǎn)的關(guān)系。
　　結(jié)果：前5位常見的革蘭陰性桿菌分別為鮑曼不動(dòng)桿菌（88株）、銅綠假單胞菌（61株）、陰溝腸桿菌（42株）、產(chǎn)氣腸桿菌（21株）和肺炎克雷伯菌（15株），共計(jì)227個(gè)菌株;AmpC酶陽(yáng)性率為9.25％（21株），ESBLs陽(yáng)性率為

3、14.10％（32株），同時(shí)產(chǎn)AmpC酶和ESBLs酶（簡(jiǎn)稱SSBLs）的陽(yáng)性率為12.78％（29株），其他類型水解酶的陽(yáng)性率為28.19％（64株）。4株產(chǎn)持續(xù)高產(chǎn)型AmpC酶的陰溝腸桿菌的ampD基因測(cè)序，其中E290號(hào)菌株未擴(kuò)增出ampD基因的條帶，其余3株均擴(kuò)增成功。E101與E539氨基酸序列一致，將其氨基酸序列與野生株進(jìn)行比對(duì)，95％一致，有8個(gè)位點(diǎn)發(fā)生突變，63位由Phe→Tyr，71位由Ala→Arg，72位由Leu→

4、Val，75位由Asp→His，95位Trp→Arg，131位Glu→Gln，141位Ile→Val，143位Arg→Leu; E487為180個(gè)氨基酸，與野生型ampD氨基酸187個(gè)氨基酸的序列相比，78％一致，有40個(gè)位點(diǎn)不一致。重組子的表型檢測(cè)結(jié)果顯示4株菌重組后對(duì)頭孢替坦、頭孢他啶、頭孢曲松和氨曲南的MIC出現(xiàn)8～64的降低。
　　結(jié)論：我院老年醫(yī)院感染患者前5位常見細(xì)菌的產(chǎn)酶率高，耐藥現(xiàn)象嚴(yán)重，應(yīng)加強(qiáng)耐藥性監(jiān)測(cè)和控制。4

5、株產(chǎn)生持續(xù)高產(chǎn)型AmpC酶的陰溝腸桿菌中3株與其ampD基因突變有關(guān)，并導(dǎo)致對(duì)β-內(nèi)酰胺類藥物MIC明顯升高;新發(fā)現(xiàn)的突變位點(diǎn)數(shù)目多且分散，其中71、72、75、131和143位氨基酸，研究的意義較大。
　　第二部分泛耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌耐藥性、同源性分析及感染病例的臨床特征
　　目的：分析我院分離的泛耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌(PDR AB)的耐藥性、同源性及感染病例的臨床特征和治療情況，為指導(dǎo)臨床合理用藥，控制感染提供依據(jù)。
　

6、　方法：收集2011年9月-2012年7月臨床分離自住院病人的鮑曼不動(dòng)桿菌，用法國(guó)生物梅里埃VITEK-2 Compact全自動(dòng)細(xì)菌分析儀及K-B藥敏紙片法分析菌株耐藥性，收集PDR AB菌株感染的病例，用回顧性統(tǒng)計(jì)分析方法分析PDR AB菌株感染病例的臨床特征及療效轉(zhuǎn)歸;用微量板半定量法檢測(cè)PDR AB菌株的生物膜形成能力;用脈沖場(chǎng)凝膠電泳法分析PDRAB菌株的同源性。
　　結(jié)果：共收集鮑曼不動(dòng)桿菌138株，其中PDR AB菌株

7、11株，占7.97％;選取PDR AB菌株感染的病例10例，分布在呼吸重癥監(jiān)護(hù)室7例(70％)，普外科2例(20％)，普通重癥監(jiān)護(hù)室1例(10％);10株P(guān)DR AB菌株對(duì)多粘菌素敏感率為100％，對(duì)目前所有常規(guī)的抗菌藥物耐藥率為100％;138株鮑曼不動(dòng)桿菌菌株，生物膜陽(yáng)性7株(5.07％)，PDR AB菌株2株，非PDR AB菌株5株;10株P(guān)DR AB菌株，分為7型(A，B，C，D，E，F(xiàn)，G)，其中D和E組類型中的2株菌的同源性