糖尿病豬模型心血管系統(tǒng)金屬蛋白酶及其抑制劑的研究.pdf

1、背景與目的：冠狀動(dòng)脈粥樣硬化是糖尿病的主要大血管并發(fā)癥。對(duì)糖尿病冠狀動(dòng)脈血管生物學(xué)研究有賴于貼近臨床的糖尿病動(dòng)物模型。本研究首次運(yùn)用鏈脲菌素建立中國貴州小型豬糖尿病模型，并對(duì)糖尿病模型豬的主動(dòng)脈炎癥狀況、心肌和主動(dòng)脈組織的金屬蛋白酶-金屬蛋白酶組織抑制劑（MMP-TIMP）系統(tǒng)進(jìn)行探討。在此基礎(chǔ)上，進(jìn)一步建立糖尿病冠狀動(dòng)脈雷帕霉素支架（SES）術(shù)后再狹窄模型，為后續(xù)機(jī)制研究奠定基礎(chǔ)。 方法：糖尿病模型組，24頭小型豬，運(yùn)用鏈脲菌

2、素（125mg/kg）誘導(dǎo)發(fā)病。正常對(duì)照組，17頭小型豬。糖尿病組模型制作成功后使用胰島素將禁食12小時(shí)后血糖控制在10mmol/L以下。分別于造模前和造模后2個(gè)月對(duì)兩組進(jìn)行糖耐量試驗(yàn)檢查，并在造模前和造模后6個(gè)月時(shí)檢測(cè)兩組肝、腎功能、血脂和血電解質(zhì)等指標(biāo)。在兩組模型穩(wěn)定數(shù)周后進(jìn)行冠狀動(dòng)脈SES放置術(shù)， 6個(gè)月后再行冠狀動(dòng)脈造影和血管內(nèi)超聲檢查分析是否發(fā)生再狹窄，并行心動(dòng)超聲檢察。全部實(shí)驗(yàn)結(jié)束后處死兩組動(dòng)物模型，采集組織樣本。檢查胰腺胰

3、島β細(xì)胞，以Western印跡、RT-PCR和免疫組織化學(xué)探討兩組主動(dòng)脈內(nèi)層組織炎性因子 [腫瘤壞死因子(TNF)-?、白介素(IL)-1β、白介素(IL)-6] 水平。用酶譜法（Zymography）、Western印跡、RT-PCR和免疫組織化學(xué)比較兩組心肌和主動(dòng)脈內(nèi)層組織以及組織培養(yǎng)液中MMP活性和水平、TIMP水平。ELISA法檢測(cè)兩組血清MMP、TIMP和腦鈉肽（BNP）水平。 結(jié)果：6個(gè)月后，完成全部模型實(shí)驗(yàn)并獲得相

4、關(guān)資料樣本的糖尿病模型豬15頭，正常對(duì)照15頭，余死于感染。糖尿病組空腹血糖極顯著高于對(duì)照組（P<0.01），胰腺胰島β細(xì)胞受到嚴(yán)重破壞，兩組糖耐量試驗(yàn)顯著差異。心動(dòng)超聲結(jié)果顯示糖尿病組收縮期室間膈和左心室后壁厚度顯著增加（P<0.05）。糖尿病組血清BNP水平、主動(dòng)脈內(nèi)層組織炎性因子TNF-?、IL-1β和IL-6水平顯著增高；心肌和主動(dòng)脈內(nèi)層組織培養(yǎng)液中MMP2和 MMP9活性及水平顯著降低；心肌和主動(dòng)脈內(nèi)層組織的TIMP1、TIM

5、P2和TIMP4 mRNA和蛋白水平顯著升高。糖尿病組SES術(shù)后再狹窄發(fā)生率與對(duì)照組未達(dá)到統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，但內(nèi)膜增生、支架和節(jié)段內(nèi)直徑狹窄和晚期丟失均顯著高于對(duì)照。上述糖尿病大動(dòng)物模型中有關(guān)MMP-TIMP的發(fā)現(xiàn)以及糖尿病SES術(shù)后再狹窄模型文獻(xiàn)中無報(bào)道。 結(jié)論：本研究首次建立鏈脲菌素誘導(dǎo)型中國貴州糖尿病小型豬模型，發(fā)現(xiàn)模型主動(dòng)脈組織內(nèi)炎癥因子顯著升高，主動(dòng)脈和心肌組織MMP-TIMP系統(tǒng)顯著異常，出現(xiàn)心臟肥厚。因此認(rèn)為該模型是研究