CD34陽性造血細(xì)胞的微小殘留病和形貌研究.pdf

1、第一部分:CD34陽性造血細(xì)胞的微小殘留病檢測目的:通過免疫磁珠法純化CD34+細(xì)胞,探討用熒光原位雜交技術(shù)檢測其中微小殘留病的敏感性.材料與方法:10例發(fā)病時(shí)白血病細(xì)胞高表達(dá)CD34抗原的白血病患者在緩解狀態(tài)時(shí)取其骨髓細(xì)胞,利用MiniMACS提純CD34+細(xì)胞,流式細(xì)胞儀檢測提純前后標(biāo)本中CD34+細(xì)胞比例.將純化前標(biāo)本和CD34+細(xì)胞分別用FISH技術(shù)進(jìn)行微小殘留病檢測,結(jié)果用組間自身配對(duì)t檢驗(yàn)方法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析.第二部分:CD34

2、陽性造血細(xì)胞形貌研究目的:應(yīng)用光學(xué)及原子力顯微鏡研究健康人、初發(fā)急性髓細(xì)胞白血病(M2b)患者的骨髓及健康人、治療后持續(xù)緩解期白血病患者、系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)患者外周血的CD34+細(xì)胞形貌特征,比較相互間差異.材料與方法:應(yīng)用MACS純化CD34+細(xì)胞,流式細(xì)胞儀檢測純化前后樣本的CD34+細(xì)胞比例.將健康人骨髓及外周血CD34+細(xì)胞和初發(fā)急性髓細(xì)胞白血病(M2b)骨髓CD34+細(xì)胞分別制作成涂片,應(yīng)用瑞氏-吉姆薩染液進(jìn)行染色,在光

3、學(xué)顯微鏡下觀察.將健康人和初發(fā)急性髓細(xì)胞白血病(M2b)骨髓各1例的CD34+細(xì)胞制成樹脂包埋塊,利用超薄切片機(jī)切成厚度為60nm的薄片,分別用原子力顯微鏡觀測細(xì)胞內(nèi)部結(jié)構(gòu).原子力顯微鏡觀測細(xì)胞表面形貌時(shí),各組每例患者隨機(jī)觀測20個(gè)細(xì)胞,每個(gè)細(xì)胞不同部位做2μ m×2μ m圖像5幅.將5幅圖像的平均粗糙度、均方根粗糙度、表面顆粒平均高度的平均值作為該細(xì)胞的參數(shù).各組的參數(shù)利用單因素組間方差分析方法進(jìn)行比較.結(jié)論:免疫磁珠技術(shù)可純化單個(gè)核

4、細(xì)胞中的CD34+細(xì)胞,其純度達(dá)到形態(tài)學(xué)研究的需要.光學(xué)顯微鏡不能辨別健康人骨髓、外周血來源的CD34+細(xì)胞,但可將這兩種CD34+細(xì)胞與初發(fā)急性髓細(xì)胞白血病患者(M2b)骨髓來源的CD34+細(xì)胞相區(qū)別.原子力顯微鏡可觀測細(xì)胞的內(nèi)部結(jié)構(gòu),初步結(jié)果未發(fā)現(xiàn)健康人CD34+細(xì)胞與CD34+白血病細(xì)胞內(nèi)部結(jié)構(gòu)存在差異.原子力顯微鏡可觀測細(xì)胞表面形貌,初發(fā)急性髓細(xì)胞白血病(M2b)組在均方根粗糙度、平均粗糙度、表面顆粒平均高度方面明顯高于其它來源