刺松藻多糖生物活性的初步研究.pdf

1、本文采用熱水浸提-乙醇沉淀法提取刺松藻多糖,并對刺松藻多糖抑制腫瘤細(xì)胞生長、誘導(dǎo)凋亡、抑制腫瘤細(xì)胞遷移的生物活性進(jìn)行研究,并對其抗凝血作用進(jìn)行初步探討。采用MTT比色法檢測刺松藻多糖對人肺腺癌A549細(xì)胞增殖的影響；Hoechst33258染色,觀察被刺松藻多糖處理后的A549細(xì)胞是否發(fā)生凋亡的形態(tài)學(xué)改變。采用免疫細(xì)胞化學(xué)、Western Blot法檢測刺松藻多糖對A549細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白Bcl-2的表達(dá)水平。利用Boyden cham

2、ber模型實驗觀察刺松藻多糖作用A549細(xì)胞以后,細(xì)胞的遷移能力發(fā)生的變化。
　　 通過心臟抽取新西蘭白兔血液制得血漿,分別與生理鹽水、濃度為125、250、500、1000μg／mL,刺松藻多糖溶液等體積混合,利用血液凝聚儀測定兔血的活化部分凝血酶時間(APTT),凝血酶原時間(PT)和凝血酶時間(TT),檢測刺松藻多糖對抗凝血作用的影響。采用頸動脈插管法抽取新西蘭白兔血,制備富血小板血漿(PRP)、貧血小板血漿(PPP),分

3、別與生理鹽水、濃度為250、500、1000μg／mL刺松藻多糖溶液混合,ADP為誘導(dǎo)劑,檢測最大聚集率。
　　 實驗結(jié)果顯示刺松藻多糖對肺腺癌系A(chǔ)549細(xì)胞的增殖有明顯的抑制作用,且與多糖濃度及其作用時間有密切的依賴關(guān)系,而且經(jīng)刺松藻多糖處理過的A549細(xì)胞發(fā)生明顯的形態(tài)學(xué)改變,細(xì)胞中Bcl-2蛋白水平下降,表明刺松藻多糖具有誘導(dǎo)A549細(xì)胞凋亡的作用； Boyden chamber模型結(jié)果顯示刺松藻多糖能顯著抑制A549細(xì)胞