碳納米管的功能化、毒性及用作疼痛基因載體的初步研究.pdf

1、目的:制備功能化單壁碳納米管混懸液;評估碳納米管的細(xì)胞毒性;評價(jià)鞘內(nèi)注射功能化單壁碳納米管/NR2B-siRNA復(fù)合物對福爾馬林炎性痛小鼠的基因沉默效果。
　　方法:
　　(1)先用表面活性劑十六烷基三甲基溴化銨(CTAB)和超聲方法，分散修飾不溶于水的單壁碳納米管(SWNT)和羧基化單壁碳納米管(SWNT-COOH)形成功能化單壁碳納米管(f-SWNT)混懸液，將功能化單壁碳納米管與NR2B-siRNA以不同質(zhì)量比混合，靜

2、置后高速離心，取上清液行瓊脂糖凝膠電泳，通過凝膠成像系統(tǒng)檢測功能化單壁碳納米管與NR2B-siRNA的結(jié)合情況。
　　(2)培養(yǎng)Hela細(xì)胞，用細(xì)胞活力(MTT)法和細(xì)胞凋亡實(shí)驗(yàn)(Hochest33342)評估 SWNTs、SWNT-COOH、CTAB及SWNT-COOH/CTAB的細(xì)胞毒性。
　　(3)選取雄性C57BL/6小鼠40只，體重18-22kg，隨機(jī)分為4組(n=10):空白組（C組），陰性對照組（N組），實(shí)驗(yàn)組

3、（A組），陽性對照組（P組）。分別行鞘內(nèi)注射，七天后建立福爾馬林炎性痛小鼠模型，測定術(shù)后1h自發(fā)痛行為學(xué)改變，取脊髓L4-6節(jié)段采用RT-PCR法檢測NR2BmRNA表達(dá)。
　　結(jié)果:
　　(1)表面活性劑十六烷基三甲基溴化銨（CTAB）修飾羧基化單壁碳納米管能形成較穩(wěn)定的功能化單壁碳納米管混懸，功能化單壁碳納米管(f-SWNTs)能與NR2B-siRNA很好地結(jié)合，且達(dá)到飽和時(shí)二者結(jié)合的質(zhì)量比為1∶1.5-1∶2之間。

4、r>　　(2)材料學(xué)檢查表明SWNTs含有更多的金屬雜質(zhì);細(xì)胞活力和細(xì)胞凋亡實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)羧基化修飾的單壁碳納米管(SWNT-COOH)比原始單壁碳納米管(SWNTs)毒性小，濃度曲線顯示表面活性劑修飾后的羧基化單壁碳納米管的毒性與表面活性劑十六烷基三甲基溴化銨（CTAB）相關(guān)，在低濃度范圍(0.5-50μg/ml)內(nèi)CTAB和SWNT-COOH/CTAB基本無細(xì)胞毒性（細(xì)胞毒性分級為0-1級）。
　　(3)對于福爾馬林所致的Ⅰ相急性痛

5、，所有組間的急性期傷害性反應(yīng)無差別(P＞0.05)，陽性對照組（P組）和實(shí)驗(yàn)組（A組）小鼠對福爾馬林所致的Ⅱ相痛的傷害性反應(yīng)顯著降低(P＜0.02);陽性對照組（P組）和實(shí)驗(yàn)組（A組）小鼠脊髓NR2BmRNA表達(dá)均低于其他對照組(P＜0.05)。
　　結(jié)論:
　　(1)十六烷基三甲基溴化銨（CTAB）能較好地分散羧基化單壁碳納米管(SWNTs)形成功能化單壁碳納米管混懸液(f-SWNTs)，f-SWNTs能與siRNA很好地