1、實(shí)驗(yàn)?zāi)康模后w外觀察葡萄糖、胰島素和吡格列酮對大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs)向成骨細(xì)胞分化的影響,探討三者對骨代謝的作用機(jī)制。 實(shí)驗(yàn)方法: 從大鼠長骨骨髓分離獲取間充質(zhì)干細(xì)胞,在不同糖濃度(5.6mM、25mMl、50mM)及胰島素(0.6ug/ml)與吡格列酮(0.1ug/ml)干預(yù)下向成骨細(xì)胞誘導(dǎo)分化培養(yǎng)21天;茜素紅染色、光鏡計(jì)數(shù)礦化率;real time PCR 測定成骨細(xì)胞的標(biāo)記物堿性磷酸酶(ALP),骨鈣素
2、(BGP)及轉(zhuǎn)錄因子Runx2 mRNA 表達(dá),進(jìn)行不同糖濃度組間及胰島素和吡格列酮干預(yù)后的變化比較。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果: 細(xì)胞誘導(dǎo)培養(yǎng)21天后,茜素紅染色結(jié)果顯示,隨著糖濃度升高,礦化率顯著降低,25mM 糖濃度組與對照組(5.6mM)相比礦化率降低了21%,50mM 糖濃度組與對照組(5.6mM)相比礦化率降低了55%,差異均有顯著性(P<0.01)。Real time PCR結(jié)果顯示,隨著糖濃度升高,ALP,BGP 及Run
3、x2 mRNA 表達(dá)顯著降低。25mM 糖濃度組與對照組(5.6mM)相比,ALP,BGP 及Runx2 mRNA 表達(dá)水平分別降低了35%、26%、24%,差異均有顯著性(P<0.01);50mM 糖濃度組與對照組(5.6mM)相比,ALP、BGP 及Runx2 mRNA 表達(dá)水平也顯著降低(P<0.01)。在三種糖濃度下,茜素紅染色結(jié)果顯示,與沒有加藥物組相比,胰島素干預(yù)組,礦化率明顯提高,分別提高了16%、19%、20%,差異均有
4、顯著性(P<0.05);吡格列酮干預(yù)組,礦化率明顯降低,分別降低了20%、25%、25%,差異均有顯著性(P<0.05);吡格列酮和胰島素共同干預(yù)組礦化率接近于未加藥物組,差異無顯著性(P>0.05)。Real time PCR 結(jié)果顯示,在相同糖濃度下,與沒有加藥物組相比,胰島素干預(yù)組ALP,BGP 及Runx2 mRNA 表達(dá)水平顯著升高(P<0.01),吡格列酮干預(yù)組,ALP,BGP 及Runx2 mRNA 表達(dá)水平顯著降低(P<
5、0.01),吡格列酮和胰島素共同干預(yù)組mRNA 表達(dá)水平接近于未加藥物組,差異無顯著性(P>0.05)。 實(shí)驗(yàn)結(jié)論: 1、高糖能抑制BMSCs 向成骨細(xì)胞分化,可能為糖尿病性骨質(zhì)疏松形成的重要機(jī)制之一。 2、胰島素可促進(jìn)BMSCs 向成骨細(xì)胞分化,并可能改善高糖對BMSCs 分化的抑制作用,可能會(huì)減低糖尿病骨質(zhì)疏松癥的發(fā)病率。 3、吡格列酮能抑制BMSCs 向成骨細(xì)胞分化,它可能通過使BMSCs 向成骨細(xì)