無創(chuàng)清醒挪威褐鼠過敏性哮喘模型建立及應(yīng)用雷公藤多苷治療的探索.pdf

1、目的:
　　建立卵蛋白(OVA)致敏激發(fā)后，在挪威褐鼠無創(chuàng)且清醒的狀態(tài)下，可觀察和記錄到過敏性哮喘發(fā)作全過程即速發(fā)相(EAR)和遲發(fā)相(LAR)的動物模型。并應(yīng)用此模型，研究雷公藤多苷(GTW)對過敏性哮喘EAR和LAR的影響，初步探討其可能的作用機制。
　　方法:
　　第一部分:模型建立
　　66只挪威褐鼠按致敏液(OVA和Al(OH)3)不同平均分為11組，單純注射OVA的4組（0.01、0.1、1和10mg

2、/只）;OVA混合Al(OH)3干粉的5組(0.1+100、1+100、10+100、1+52和1+4 mg/只);OVA混合Al(OH)3膠體的1組(10+4mg/只);正常對照組1組。于第0天和第5天在每只動物背部選取2點進行皮下注射，對10個致敏組注射相應(yīng)致敏液，對正常對照組注射生理鹽水，每點均注射0.2ml。在第37天，所有動物霧化吸入5％OVA10min激發(fā)。然后立即放入體積描記器中連續(xù)記錄16h呼氣相延長參數(shù)(Penh)值，

3、繪制Penh變化曲線，計算EAR Penh曲線下面積(AUC)、LAR AUC、EAR峰值、LAR峰值、LAR持續(xù)時間和EAR及LAR出現(xiàn)次數(shù)。采集第0、7、14、21、28、35、38天血清，用ELISA法檢測血清中特異性IgE含量。HE染色觀察肺病理改變。
　　第二部分:藥物治療
　　30只挪威褐鼠平均分為5組，即正常對照組、模型組和3個GTW組。采用OVA致敏激發(fā)挪威褐鼠，清醒動物體積描記器記錄16 h反映氣道阻力變化

4、的Penh值，計算EAR AUC、LAR AUC、LAR持續(xù)時間，建立無創(chuàng)清醒挪威褐鼠過敏性哮喘發(fā)作全程記錄模型。3個GTW組動物分別于第30至第37天灌胃給予GTW10、50和200mg·kg-1，每次2mL，每天1次。正常對照組和模型組給予等量生理鹽水。HE染色觀察肺、肝和腎臟病理改變。檢測谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)、谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、肌酐(CR)、血清尿素氮（BUN）值，分析藥物肝腎毒性。采用實時熒光定量PCR的方法(RT2 Pro

5、filer PCR Array Rat Allergy& Asthma)篩選差異表達基因。
　　結(jié)果:
　　第一部分:模型建立
　　除單純注射OVA0.01mg組外，其他各組大鼠血清特異性IgE含量均比正常對照組顯著升高(P＜0.05)，且在致敏1周后IgE開始大量產(chǎn)生，直到第5周均呈持續(xù)增長趨勢(以O(shè)VA10+Al(OH)3100組為例）。觀察到了哮喘發(fā)作的速發(fā)和遲發(fā)雙相氣道反應(yīng)，其特點表現(xiàn)在Penh值的顯著增高，且

6、與正常對照組相比，模型組(以O(shè)VA10+Al(OH)3100、OVA10+Al(OH)3 gel4組為例）的EAR峰值、LAR峰值、LAR持續(xù)時間、EAR AUC和LARAUC均顯著增大(P＜0.05)。模型組(以O(shè)VA10+ Al(OH)3100組為例）有以氣道周圍嗜酸性粒細胞浸潤為主的炎癥表現(xiàn)。
　　第二部分:藥物治療
　　在給予GTW50 mg·kg-1治療后特異性IgE含量比模型組顯著降低(P＜0.05)。給予GTW

7、10、50和200 mg·kg-1治療后，EAR AUC、LAR AUC、LAR持續(xù)時間均比模型組顯著降低（P＜0.05）;生化指標ALT均比模型組顯著升高(P＜0.05)，且隨藥物劑量增加，ALT數(shù)值增大;CR數(shù)值也均比模型組顯著升高(P＜0.05);AST和BUN兩個指標在給藥后沒有明顯變化;均未對肝腎造成明顯毒性病理改變。GTW能減輕肺部嗜酸性粒細胞浸潤，且隨劑量增加嗜酸性粒細胞數(shù)量減少。GTW能使過敏性哮喘中異常調(diào)節(jié)的基因發(fā)生明

8、顯改善，其中變化最明顯的基因為Mmp9，在藥物治療后出現(xiàn)明顯下調(diào)，且下調(diào)強度有劑量依賴性增強的趨勢，在給予GTW10、50和200 mg·kg-1治療后，下調(diào)3.62、7.67、38.15倍(P＜0.05)。
　　結(jié)論:
　　在OVA激發(fā)后觀察到了哮喘發(fā)作全程，成功建立了非創(chuàng)傷性、清醒狀態(tài)挪威褐鼠的過敏性哮喘發(fā)作全程記錄模型。確立以穩(wěn)定出現(xiàn)哮喘EAR和LAR的OVA10+ Al(OH)3100組方法為本模型的最佳造模方法。發(fā)