神經(jīng)干細胞移植治療鼠類脊髓栓系綜合征的實驗研究.pdf

1、目的：脊髓栓系綜合征為先天性或后天性原因造成脊髓異常牽拉,導(dǎo)致神經(jīng)功能障礙.患兒往往留有大小便失禁、二下肢癱等嚴(yán)重后遺癥,是我國傷殘兒童重要病因之一，給患兒生活、心理及家庭帶來很大影響,更影響我國優(yōu)生優(yōu)育國策和民族素質(zhì).該病在我國有較高的發(fā)病率。目前主要依靠手術(shù)并輔以藥物治療,但許多病例治療效果仍然不甚滿意,原因是某些類型脊髓栓系手術(shù)難以完全松解,或手術(shù)后再栓系,更主要由于治療時部分神經(jīng)細胞已經(jīng)死亡,無法修復(fù).因此試圖尋找一個新的有效的

2、治療方法,如通過新的細胞移植到病變脊髓內(nèi)來替代缺失的神經(jīng)細胞,促進神經(jīng)功能恢復(fù),具有十分重要的意義. 目的： (1)制作類脊髓栓系綜合征的大鼠模型,為神經(jīng)干細胞移植治療脊髓栓系提供實驗?zāi)Ｐ停?(2)從胚胎大鼠脊髓提取神經(jīng)干細胞進行分離和培養(yǎng),并證實其具有增殖及分化成神經(jīng)細胞的潛能； (3)將胎鼠的神經(jīng)干細胞移植到類脊髓栓系綜合征綜合征大鼠的病變脊髓中,觀察是否有治療效果。 方法 (1)動物

3、模型制作:成年雌性SD大鼠,手術(shù)暴露脊髓及終絲,將終絲懸吊在5克砝碼下,使脊髓在5克砝碼的拉力下被牽拉下移,引起神經(jīng)損害,然后用縫針將下移的脊髓固定在椎管旁組織上,造成一永久性類脊髓栓綜合征系； (2)神經(jīng)干細胞分離培養(yǎng):從孕17d大鼠胚胎脊髓中分離、培養(yǎng)神經(jīng)干細胞并誘導(dǎo)其分化,通過免疫組化技術(shù)研究其特性；(3)神經(jīng)干細胞移植:大鼠類脊髓栓系綜合征模型制作3天后,將未分化的神經(jīng)干細胞注入病變脊髓內(nèi),觀察大鼠的運動功能,2月后處死

4、大鼠,研究移植后的干細胞在體內(nèi)存活、遷移及分化情況. 結(jié)果： (1)獲得了二后肢癱瘓的類脊髓栓系綜合征鼠模型,病理顯示病變脊髓神經(jīng)元數(shù)量明顯減少,神經(jīng)功能受損； (2)從胚胎大鼠脊髓內(nèi)獲得了大量未分化、呈懸浮生長的神經(jīng)干細胞球,傳數(shù)代后仍有干細胞特性,在血清誘導(dǎo)下,可分化為神經(jīng)元及神經(jīng)膠質(zhì)細胞. (3)類脊髓栓系綜合征大鼠移植干細胞后運動功能改善,神經(jīng)元數(shù)目增多,顯著好于未移植組.免疫組化方法證實移植后的

5、干細胞在體內(nèi)可以存活、遷移、分化成神經(jīng)細胞。 結(jié)論：(1)鼠類脊髓栓系綜合征模型容易制作,存活率高,存活期長,并能耐受再次手術(shù),為探索脊髓栓系征的治療提供了一個比較合適的動物模型。 (2)本實驗證實胚胎大鼠脊髓內(nèi)存在神經(jīng)干細胞,能進行分離、培養(yǎng)和多次傳代,并分化成神經(jīng)元及神經(jīng)膠質(zhì)細胞,為神經(jīng)干細胞的基礎(chǔ)研究及臨床應(yīng)用奠定一定基礎(chǔ)。 (3)大鼠胚胎神經(jīng)干細胞體內(nèi)、體外均具有多向分化潛能,移植神經(jīng)干細胞細胞移植到病變