神經(jīng)干細胞耳蝸移植——圓窗膜和耳蝸底轉(zhuǎn)途徑的比較.pdf

1、授予單位代碼：研究生學(xué)號：密級：鄭州大學(xué)碩士學(xué)位論文論文題目：作者姓名：學(xué)科門類：專業(yè)方向：導(dǎo)師姓名、職稱：神經(jīng)干細胞耳蝸移植——圓窗膜和耳蝸底轉(zhuǎn)途徑的比較楊陽醫(yī)學(xué)耳鼻咽喉科學(xué)董明敏教授二零零五年五月篆五盟墮塵鄭州大學(xué)2005年碩士研究生畢業(yè)論文神經(jīng)干細胞內(nèi)耳移植一圓窗膜和耳蝸底轉(zhuǎn)途徑的比較材料與方法本實驗分為兩部分。第一部分：細胞培養(yǎng)。從24小時新生豚鼠海馬組織中分離得到神經(jīng)干細胞，用神經(jīng)干細胞篩選培養(yǎng)基進行體外培養(yǎng)，用Nestin免

2、疫組化染色鑒定神經(jīng)干細胞特異性標(biāo)志物巢素蛋白；胎牛血清培養(yǎng)基誘導(dǎo)其分化并觀察分化細胞形態(tài)；Brdu標(biāo)記神經(jīng)干細胞用于移植。第二部分：動物實驗。選用健康、耳廓反應(yīng)靈敏、無中耳感染、ABR測試雙耳聽力在20～30dB、體重200～300克純白紅目豚鼠68只(雌雄不限)作為實驗動物。隨機地分為七組。I組：空白對照組。4只(8耳)，不施加任何處理因素。用于ABR閾值測試、耳蝸基底膜鋪片四唑氮藍染色的正常對照。II組：單純耳蝸底轉(zhuǎn)打孔組。20只(

3、40耳)，僅施以耳蝸底轉(zhuǎn)打孔術(shù)，不致聾、不注射神經(jīng)干細胞。分別于術(shù)后第3天、7天、14天、28天測ABR后各處死4只，觀察手術(shù)操作對聽力的影響，以及通過耳蝸基底膜鋪片四唑氮藍染色觀察手術(shù)操作對聽毛細胞的損傷(與IⅡ組作比較)；在術(shù)后第7天處死另4只，用于BDNF免疫組化染色觀察耳蝸底轉(zhuǎn)鼓階中是否有BDNF的表達(與Ⅳ組作比較)。III組：單純圓窗膜打孔組。20只(40耳)，僅施以圓窗膜打孔術(shù)，不致聾、不注射神經(jīng)干細胞。與II組在相同時間

4、點(術(shù)后第3天、7天、14天、28天)測ABR后各處死4只，觀察手術(shù)操作對聽力的影響，以及通過耳蝸基底膜鋪片四唑氮藍染色觀察手術(shù)操作對聽毛細胞的損傷(與II組作比較)；與II組在相同時間點處死另4只，用于BDNF免疫組化染色觀察耳蝸底轉(zhuǎn)鼓階中是否有BDNF的表達(與V組作比較)。Ⅳ組：未致聾耳蝸底轉(zhuǎn)打孔注神經(jīng)干細胞組。8只(16耳)，不致聾、經(jīng)耳蝸底轉(zhuǎn)打孔向內(nèi)耳注入Brdu標(biāo)記的神經(jīng)干細胞，在術(shù)后第7天處死4只，用于石蠟切片Brdu免疫

5、組化染色觀察神經(jīng)干細胞在耳蝸鼓階中的存活以及分布情況(與Ⅵ組、V組作比較)：在術(shù)后第7天處死另4只，用于BDNF免疫組化染色觀察耳蝸底轉(zhuǎn)鼓階中神經(jīng)干細胞表達BDNF的情況(與II組作比較)。V組：未致聾經(jīng)圓窗膜注射神經(jīng)干細胞組。8只(16耳)，不致聾、經(jīng)圓窗膜向內(nèi)耳注入Brdu標(biāo)記的神經(jīng)干細胞，與Ⅳ組在相同時間點處死4只，用于石蠟切片Brdu免疫組化染色觀察神經(jīng)干細胞在耳蝸鼓階中的存活以及分布情況(與Ⅳ組、Ⅶ組分別作比較)；與Ⅳ組在相同