豚鼠神經(jīng)干細胞體外分化毛細胞樣細胞及耳蝸移植的實驗研究.pdf

1、目的:建立豚鼠神經(jīng)干細胞體外培養(yǎng)的模型，為神經(jīng)干細胞移植治療感音神經(jīng)性耳聾創(chuàng)造基礎(chǔ)。 方法:取剛出生的豚鼠靠近海馬區(qū)的腦組織，體外于無Ca、Mg的D-Hank's溶液中進行分離，單細胞懸液置于含有20％B27、20ng/ml EGF、20ng/ml bFGF的培養(yǎng)基中懸浮培養(yǎng)。用Nestin免疫細胞化學(xué)法及免疫熒光鑒定神經(jīng)干細胞，傳代培養(yǎng)。 結(jié)果:所取的胎鼠細胞組織細胞可形成集落樣生長的神經(jīng)干細胞團，Nestin免疫細

2、胞化學(xué)染色陽性，但是不表達Brn-3c和myosinⅦa。 結(jié)論:小鼠的神經(jīng)干細胞可經(jīng)體外分離純化，建立細胞系，具有明顯的增殖能力可作為神經(jīng)干細胞移植治療感音神經(jīng)性耳聾的供體細胞。 目的:體外誘導(dǎo)豚鼠神經(jīng)干細胞向毛細胞樣細胞分化，初步探討神經(jīng)干細胞移植治療感音神經(jīng)性聾的可行性。 方法:取純化的豚鼠神經(jīng)干細胞，置于含有20％B27、20ng/ml EGF、20ng/mlbFGF、TGF-α、IGF-I、10％FBS

3、的DMEM/F12培養(yǎng)基中貼壁培養(yǎng)，四周后，免疫組化鑒定毛細胞特異表型myosin Ⅶa，pan-cytokeratin。 結(jié)果:培養(yǎng)細胞經(jīng)免疫組化鑒定表達出毛細胞的特異性標記抗體myosinⅦa，pan-cytokeratin。 結(jié)論:神經(jīng)干細胞可經(jīng)體外分離純化向毛細胞分化，并表現(xiàn)出毛細胞的特異性表型，這可能為神經(jīng)干細胞移植治療感音神經(jīng)性聾提供基礎(chǔ)。 目的：研究神經(jīng)干細胞(Neural stem cells，

4、NSC)移植入豚鼠耳內(nèi)存活以及遷移情況。 方法:豚鼠用白噪聲制成神經(jīng)性耳聾模型，取原代培養(yǎng)的神經(jīng)干細胞，用Hoechst33342進行熒光素標記，在豚鼠內(nèi)耳損傷后即刻移植入損傷耳內(nèi)，移植后7～10天處死豚鼠，觀察細胞標記熒光情況。處死前分別行ABR及40Hz誘發(fā)電位檢測。 結(jié)果:神經(jīng)干細胞在豚鼠的內(nèi)耳中可以存活并沿著注射部位的骨壁生長結(jié)論神經(jīng)干細胞移植入噪聲性耳聾豚鼠的耳內(nèi)可存活，并沿著注射的部位向上遷移生長，為進一步