尿微量白蛋白和肌紅蛋白半定量金免疫層析法的研究.pdf

1、本文分為兩個部分研究了尿微量白蛋白和肌紅蛋白半定量金免疫層析法。 第一部分：尿微量白蛋白半定量金免疫層析法的建立及初步評價。尿微量白蛋白（microalbuminuria, mAlb）是指尿中白蛋白含量超出正常水平，但低于常規(guī)試帶法的可檢測范圍。其濃度范圍在20～200mg/L。糖尿病、高血壓等并發(fā)腎病，導致腎小球濾過膜電荷的丟失，以及基底膜孔徑有所改變，從而使得尿中出現(xiàn)微量白蛋白。近年來發(fā)現(xiàn)，心血管疾病患者mAlb陽性的比例也

2、大大超過健康人群。mAlb是反映腎功能是否受損傷的很靈敏的指標，其排出增加往往是疾病早期的改變。臨床研究認為早期腎病仍有逆轉(zhuǎn)的希望，如果發(fā)展到臨床蛋白尿，腎臟病變已很難逆轉(zhuǎn)，所以需要建立敏感、簡便的尿微量白蛋白的測定方法，以期盡早發(fā)現(xiàn)腎臟的病變。 采用自制的抗白蛋白單克隆抗體建立雙抗體夾心膠體金免疫層析法，但實驗發(fā)現(xiàn)其測定mAlb的工作線性范圍不夠理想。經(jīng)過進一步的摸索和改進，用其中一只單抗標記上膠體金，而在膜上包被一定量的白蛋

3、白與尿液中未知濃度的白蛋白競爭該膠體金標記抗體，同時包被一定濃度的羊抗鼠IgG作為參比線，從而建立了檢測mAlb的半定量膠體金免疫層析法。并對其檢測性能進行了初步評價。該試劑經(jīng)人白蛋白標準液測定，結(jié)果判定可分為<20、20～50、50～200和>200mg/L 4個半定量區(qū)段。本法的優(yōu)點還在于克服了HOOK效應，白蛋白10,000mg/L時也未出現(xiàn)假陰性。137例臨床尿標本用該法與散射免疫比濁法進行對比測定，結(jié)果符合性好。該方法特異性強

4、，簡便快速，還可單個測試，適用于基層醫(yī)院及診所。 第二部分：肌紅蛋白半定量金免疫層析法的建立及初步評價。急性心肌梗死（AMI）屬于危重急癥，危及人類生命，需盡早予以確診和治療。診斷AMI的主要依據(jù)是特征性病史、心電圖改變和血清生化標志物的檢測。然而在AMI的早期，特別是在梗死發(fā)生后的最初幾個小時，患者沒有明顯特征性的臨床表現(xiàn)，心電圖改變又不典型時，血清生化標志物的檢測就有非常重要的作用。血清肌紅蛋白（Mb）已被公認為目前協(xié)助診斷

5、AMI早期最敏感的生化標志物之一。心肌細胞發(fā)生壞死后0.5~1小時，血清Mb水平即可升高，早于其他生化標志物（如CK-MB和心肌鈣蛋白等）。 隨著臨床實驗室測定技術(shù)的快速發(fā)展，心肌損傷血液生化標志物的檢測已從酶活性的測定發(fā)展到以蛋白質(zhì)的量為主的免疫檢測。結(jié)合AMI 是急性重癥，故研制適宜的急診快速免疫測定方法很有必要。 采用本實驗室提供的幾株抗Mb單抗，篩選出最匹配的一對，C6D和G3B，建立了雙抗體夾心Mb半定量金免疫

6、層析法。即在膜上包被C6D，膠體金標記G3B，當待測血清中含有Mb，可形成“三明治”式的紅色免疫復合物。本法的關(guān)鍵是膜上抗體濃度和金標抗體濃度的調(diào)配，包被一定量的兔抗鼠IgG作為對照線，達到半定量檢測目的。本法用肌紅蛋白標準液測定，結(jié)果分為<70、70～150和>150μg/L 3個半定量判定區(qū)段；與化學發(fā)光免疫測定法對照檢測83份血清標本，符合性良好。具有半定量的特點，方法簡便、快速、準確，適用于急性心肌梗死的早期檢測。 本研