低頻脈沖電磁場對大鼠骨髓來源的內(nèi)皮祖細胞的影響.pdf

1、實驗背景及目的：
　　缺血性心臟病是危害人類健康的重要疾病，促進內(nèi)皮修復，血管形成是治療這一疾病的主要措施。國內(nèi)外研究發(fā)現(xiàn)內(nèi)皮祖細胞不僅參與血管形成，也參與出生后血管生成和內(nèi)皮細胞損傷后的修復，并且骨髓來源內(nèi)皮祖細胞參與的血管形成占全部新生血管的5％-25％。研究發(fā)現(xiàn)EPCs的數(shù)量、功能等生物學特性與心血管疾病的危險因素如高脂血癥、糖尿病、C-反應蛋白（C-reactive protein，CRP）等成負相關，這種情況下其血管形成

2、能力下降。對此，人們提出了治療性血管形成策略。磁場作為一種外來干預手段，已發(fā)現(xiàn)其可促進內(nèi)皮細胞修復，促進內(nèi)皮細胞成纖維細胞生長因子（Fibroblast growth factorFGF)的分泌，并且在纖維蛋白包被的環(huán)境中形成三維血管結(jié)構(gòu)，提示磁場對血管形成具有促進作用。所以本實驗目的是通過研究低頻電磁場對內(nèi)皮祖細胞的影響，觀察不同的磁場強度和作用時間對EPC的生物學效應的影響，為治療性血管形成提供新的理論基礎。
　　實驗方法：<

3、br>　　第一部分骨髓內(nèi)皮祖細胞的原代培養(yǎng)，純化及鑒定無菌分離大鼠股骨及脛骨，用不完全培養(yǎng)液沖洗骨髓腔，收集細胞懸液，利用Ficoll密度梯度離心法分離骨髓單個核細胞（mononuclear cells，MNCs），接種在含有血管內(nèi)皮生長因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）、堿性成纖維細胞生長因子（basic fibroblast growth factor，bFGF）的培養(yǎng)基中進行培養(yǎng)

4、。取培養(yǎng)4天的細胞，利用激光共聚焦進行細胞鑒定，細胞FITC-UEA-I和Dil-acLDL雙染色陽性為正在分化的內(nèi)皮祖細胞。
　　第二部分低頻脈沖電磁場對內(nèi)皮祖細胞增殖能力、NO分泌和凋亡的影響取培養(yǎng)4天的細胞，采用不同磁場強度和作用時間的低頻脈沖電磁場作用于內(nèi)皮祖細胞，細胞干預3天后，MTT檢測EPC的增殖活性，流式細胞儀檢測細胞周期和凋亡，硝酸酶還原法檢測NO分泌水平。
　　統(tǒng)計學分析：數(shù)值均以x±s表示。數(shù)據(jù)采用SP

5、SS11.0統(tǒng)計軟件包進行統(tǒng)計分析，應用單因素方差分析進行統(tǒng)計學分析，有統(tǒng)計學意義的采用LSD-t檢驗進一步比較。
　　實驗結(jié)果：
　　1.體外成功培養(yǎng)出大鼠骨髓來源的內(nèi)皮祖細胞，并經(jīng)鑒定證實。
　　2.與對照組相比，0.6mT(4h、8h)和1.0mT(2h)可促進內(nèi)皮祖細胞的增殖（P＜0.01），1.0mT(4h,8h)細胞增殖活性與對照組相比明顯下降（P＜0.01）。
　　3.與對照組相比，0.6mT(8h

6、)和1.0mT(2h)可促進內(nèi)皮祖細胞的NO分泌（P＜0.01），1.0mT(2h)組與0.6mT(8h)組相比無統(tǒng)計學差異；1.0mT(8h)細胞NO分泌與對照組相比下降（P＜0.01）。
　　4.與對照組相比，1.0mT(8h)可促進內(nèi)皮祖細胞的凋亡（P＜0.01），其余各組與對照組相比差別無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。
　　結(jié)論：
　　低頻脈沖電磁場可影響B(tài)M-EPCs的生物學特性，具有強度和時間依賴性，適當強度