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文檔簡介
1、背景與目的: 葡萄膜炎是一種病因復雜的疾病,愈來愈多的證據表明其發(fā)病過程中有多種細胞因子參與,抗炎因子與促炎因子的失衡被認為是其中重要的一個環(huán)節(jié)。白細胞介素-10(IL-10)是一種強有力的抗炎物質,它可抑制輔助性T細胞產生細胞因子及其活性,抑制趨化因子、細胞粘附因子、活性氧和氮介質等細胞活性物質的生成。研究表明IL-10作為一種有效的細胞因子調節(jié)因子在多種炎癥中發(fā)揮重要的保護作用。能否將IL-10應用于葡萄膜炎的治療,目前國外
2、報道尚不多見,國內尚未發(fā)現相關報道。本研究應用大腸桿菌內毒素(LPS)免疫Wistar大鼠建立實驗性內毒素誘導的葡萄膜炎疾病模型(ElU),該模型可作為人類全葡萄膜炎的動物模型,為葡萄膜炎免疫機制及治療的實驗研究提供前提。在制備的葡萄膜炎模型中全身使用白細胞介素-10,觀察其對臨床表現、組織學改變以及眼內液和血清中腫瘤壞死因子(TNF-α)、IL-6和IL-10水平變化的影響,探討IL-10對EIU的治療作用。 方法:
3、1.建立內毒素誘導的葡萄膜炎動物模型 選擇15只6~8周齡的雄性Wistar大鼠,體重150~180克。按隨機的原則分為空白對照組(3只)和實驗組(12只)。將LPS溶于無菌生理鹽水中,使之終濃度為2 mg/ml,分別取75μl該溶液注射至實驗組Wistar大鼠的雙后足墊部,每只大鼠的注射總量達到300μg。對照組大鼠雙后足墊注射等量無菌生理鹽水。分別在不同的時段觀察眼部臨床改變如虹膜充血、前房閃輝、房水細胞和前房滲出等,根據修
4、改的Hoekzema等的評分標準對大鼠EIU的臨床表現進行評價與記分。在LPS注射后24小時、3天、7天各處死EIU大鼠5只,進行組織病理學檢查,參照Tilton等的標準對大鼠EIU的病理改變進行組織學分級。 2.白細胞介素-10對大鼠內毒素誘導的葡萄膜炎的治療作用 (1)選擇6~8周齡的雄性Wistar大鼠54只。按隨機的原則分為三組:空白對照組(A組6只)、EIU組(陽性對照組,B組24只)和IL-10治療組(C組2
5、4只),每組又分為免疫后4小時、24小時和3天三個亞組。 (2)A組大鼠雙后足墊注射無菌生理鹽水;B組大鼠每只雙后足墊注射大腸桿菌內毒素300μg;C組分別于注射大腸桿菌內毒素前4.0小時、0.5小時按1μg/kg體重尾靜脈內注射重組IL-10,再雙后足墊注射大腸桿菌內毒素300μg。 (3)臨床及組織學檢查:Wistar大鼠免疫后每2小時進行裂隙燈及眼底鏡觀察,詳細記錄其發(fā)病時間、高峰時間、炎癥持續(xù)時間及臨床表現等,根
6、據臨床評分標準對大鼠眼部炎癥表現進行評價與記分。分別于免疫后4小時、24小時和3天于大鼠內眥靜脈叢取血,處死大鼠后取眼球。一只眼球取眼內液進行細胞因子測定,另一只眼球常規(guī)做病理切片,光學顯微鏡下觀察病理改變,并參照修改的病理分級標準對大鼠進行分級。 (4)應用酶聯免疫吸附試驗(EL,ISA法)檢測血清和眼內液中的IL-6、IL-10和TNF-α含量。 (5)統(tǒng)計方法:全部數據以均數±標準差(x±s)表示,應用SPSSl1
7、.5統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計學處理。 結論: 大腸桿菌內毒素在Wistar大鼠誘導出嚴重的類似于人類全葡萄膜炎的動物模型。該方法簡便、穩(wěn)定、重復性好、發(fā)病率高,這為進一步研究葡萄膜炎的免疫機制及治療方法奠定了可靠的實驗基礎,同時本研究就內毒素誘導葡萄膜炎(EIU)與S抗原誘導的實驗性自身免疫性葡萄膜炎(EAU)進行了比較并初步探討了LPS的免疫作用機制。 IL-10作為炎性細胞因子合成的抑制因子,全身使用能顯著抑制內毒素
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