版權說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內容提供方,若內容存在侵權,請進行舉報或認領
文檔簡介
1、目的:構建重組質粒pIRES2-EGFP-gag,將其轉染人精子,與金黃地鼠去透明帶卵母細胞受精后,檢測HIV-1gag基因在人精子染色體上的整合與在早期胚胎細胞中的復制和表達,為HIV-1基因能否在父嬰間垂直傳遞提供直接的實驗證據(jù)。
方法:⑴pIRES2-EGFP質粒;⑵ΔNRF 逆轉率病毒質粒;⑶人臍帶間充質干細胞;⑷精子,取自健康男性自愿者;⑸卵母細胞,取自成熟雌性金黃地鼠。⑹pIRES2-EGFP-gag質粒構建,
2、用酶切、PCR 和基因測序3 種方法鑒定重組質粒是否構建成功;⑺細胞培養(yǎng)及轉染,觀察綠色熒光蛋白的表達,檢測pIRES2-EGFP-gag 質粒能否在真核細胞中表達;⑻人精子與金黃地鼠去透明帶卵母細胞異種體外受精,獲取受精卵和2-細胞胚胎;⑼熒光原位雜交(FISH),檢測HIV-1 gag 基因是否在人精子、受精卵雄原核上整合及在胚胎細胞中復制;⑽RT-PCR,檢測HIV-1 gag 基因是否在人精子、胚胎細胞中轉錄;⑾免疫熒光技術,檢
3、測HIV-1 gag基因是否在人精子、胚胎細胞中翻譯。
結果:①質粒經EcoRI和BamHI分別單酶切及EcoRI 和BamHI雙酶切,PCR和測序證實pIRES2-EGFP-gag質粒構建成功;②質粒經脂質體包裹后轉染人臍帶間充質干細胞,可見綠色熒光蛋白持續(xù)表達,表明構建的pIRES2-EGFP-gag質粒能在真核細胞中表達;③人精子與金黃地鼠去透明帶卵母細胞異種體外受精,成功地獲取了用于實驗的受精卵和2-細胞胚胎;④F
4、ISH:在人精子頭部、人精子染色體,受精卵雄原核和2-細胞胚兩個間期核上均觀察到HIV-1 gag DNA陽性雜交信號;⑤RT-PCR:在經pIRES2-EGFP-gag轉染的人精子及其與金黃地鼠去透明帶卵母細胞受精后所得的胚胎樣本中,觀察到HIV-1 gag基因陽性帶;⑥免疫熒光檢測:在經pIRES2-EGFP-gag轉染的人精子樣本中未觀察到HIV-1 gag p24蛋白的陽性信號,但在其與金黃地鼠去透明帶卵母細胞受精后所得的胚胎樣
5、本中,觀察到HIV-1 gag p24 蛋白的陽性信號。
結論:⑴成功地構建了重組質粒pIRES2-EGFP-gag;⑵pIRES2-EGFP-gag質??梢栽谡婧思毎斜磉_;⑶HIV-1 gag基因能通過精子膜進入精子細胞并能整合到精子基因組內;⑷攜帶HIV-1 gag基因的人精子可以完成正常受精過程;⑸精子介導的HIV-1 gag基因在早期細胞中與宿主基因組同步復制并通過卵裂進入子細胞;⑹HIV-1 gag基因可在人精
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權益歸上傳用戶所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網頁內容里面會有圖紙預覽,若沒有圖紙預覽就沒有圖紙。
- 4. 未經權益所有人同意不得將文件中的內容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內容的表現(xiàn)方式做保護處理,對用戶上傳分享的文檔內容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內容負責。
- 6. 下載文件中如有侵權或不適當內容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準確性、安全性和完整性, 同時也不承擔用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- 人精子攜帶的HBs和HBc基因在早期胚胎細胞中的復制與蛋白表達.pdf
- 多個HIV-1基因的融合及其在BEVS中的表達.pdf
- 外源基因在雞早期胚胎內整合及表達的研究.pdf
- HIV-1 gag基因經卵母細胞垂直傳遞的實驗研究.pdf
- HIV-1 Gag蛋白的重組、表達與應用.pdf
- 山羊基因組中源于ERVs的lncRNA在早期胚胎發(fā)育中的作用.pdf
- 59178.人胰島素基因組基因在真核細胞中的表達及表達產物的鑒定
- BRUCE基因在人胚胎中的鑒定及表達.pdf
- 乙型肝炎病毒基因在人肝癌細胞基因組中整合位點的探討.pdf
- 光敏色素基因在轉基因玉米株系基因組的整合位點.pdf
- 7913.斑馬魚補體基因在早期胚胎以及l(fā)ps刺激胚胎中的表達
- φC31整合酶介導的外源基因在?;蚪M中整合位點的分析與應用.pdf
- 不同年齡HIV-1轉基因大鼠中HIV-1病毒蛋白及血漿中細胞因子表達水平的研究.pdf
- HCK與IFRD1基因在胚胎心臟中時空表達的研究.pdf
- 果蠅早期胚胎編碼sORF的全基因組鑒定.pdf
- 廣西三城市HIV-1型流行毒株gag基因亞型分析.pdf
- Rap1b基因在斑馬魚胚胎內的表達模式及與HoxB4基因在胚胎早期造血發(fā)育過程中的相關性研究.pdf
- IL-15基因佐劑對HIV-1 gag DNA疫苗免疫效應的影響.pdf
- 《基因組與基因、dna復制》測驗題
- 中國株HIV-1的結構基因gp120和gag的克隆、表達與顆粒樣疫苗的構建.pdf
評論
0/150
提交評論