甲氧滴滴涕的子宮毒性及對子宮內(nèi)膜血管生成素-1表達(dá)的影響.pdf

1、環(huán)境內(nèi)分泌干擾物（EndocrineDisruptingChemicals，EDCs）被定義為對維持自身平衡、生殖、發(fā)育和行為的體內(nèi)激素的合成、傳輸、鍵合、作用或清除有干擾作用的外源性物質(zhì)，這些物質(zhì)能夠模擬、強化或抑制激素合成的作用，在某些情況下，可能引發(fā)組織或器官功能異常和腫瘤發(fā)生。由于職業(yè)和環(huán)境因素使人類越來越多地暴露于這類干擾物中，嚴(yán)重影響人類的生殖功能和身體健康。
　　作為環(huán)境內(nèi)分泌干擾物之一的甲氧滴滴涕（methoxyc

2、hlor,MXC），是近年來被廣泛應(yīng)用的、代替滴滴涕的有機氯殺蟲劑，與滴滴涕相比具有在哺乳動物體內(nèi)代謝快，易排泄、毒性低等特點。MXC及其代謝產(chǎn)物已經(jīng)證實可引起雌性大鼠下丘腦-垂體-卵巢性腺軸紊亂，合成、分泌甾體激素減少，可以使子宮內(nèi)膜增厚，質(zhì)量增加，可能影響卵泡的周期性變化。而目前有關(guān)MXC對子宮內(nèi)膜血管生成的影響報道較少。因此研究甲氧滴滴涕對子宮組織，特別是對內(nèi)膜血管生成的毒性作用具有重要意義。本研究通過構(gòu)建雌性小鼠甲氧滴滴涕染毒模

3、型，觀察其對雌鼠子宮內(nèi)膜血管生成素-1表達(dá)的影響，進(jìn)一步探討MXC在子宮內(nèi)膜疾病發(fā)生發(fā)展中的作用，試圖為臨床診斷及治療提供新的理論依據(jù)。
　　本實驗分三部分：
　　第一部分：甲氧滴滴涕染毒雌性小鼠模型的構(gòu)建及其對子宮的毒性作用
　　將40只成年雌性昆明小鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)7日后，隨機分為溶劑芝麻油組（對照組）及MXC50，100，200mg/(kg·d)組，連續(xù)21d天經(jīng)腹腔注射MXC染毒，染毒結(jié)束后立即處死小鼠，觀察指標(biāo)有

4、：體重、子宮增殖指數(shù)；蘇木素-伊紅染色（Hematoxylin-EosinStain，HE）光鏡下測量子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞層增生高度和基質(zhì)細(xì)胞層厚度；放射免疫法測定血清中E2和P的水平。結(jié)果：①各劑量組小鼠體重成增長趨勢，但無顯著性差異，中高劑量組子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞增生高度和基質(zhì)細(xì)胞層厚度與對照組相比有顯著性差異。②中高劑量組子宮增殖指數(shù)隨劑量增加而升高；③中、高劑量組血清E2水平顯著降低，P與對照組比較無顯著性差異。結(jié)論：MXC①可以增加子

5、宮重量，增加子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞增生高度及基質(zhì)細(xì)胞層厚度；②中高劑量的MXC可能通過影響下丘腦-垂體-卵巢軸從而使E2水平降低；③低劑量組對子宮組織未產(chǎn)生明顯的影響。
　　第二部分：甲氧滴滴涕染毒對小鼠子宮內(nèi)膜血管生成素-1蛋白表達(dá)水平的影響
　　以實驗一中石蠟包埋子宮組織為標(biāo)本，觀察指標(biāo)有：免疫組化SP法和免疫熒光，顯微鏡下觀察，計算各劑量組平均光密度；免疫組化SP法觀察各劑量組子宮內(nèi)膜組織ANGPT-1蛋白表達(dá)水平。結(jié)果：①

6、SP法顯示隨染毒劑量增加，中高劑量組ANGPT-1蛋白在子宮內(nèi)膜中的表達(dá)明顯高于對照組，平均光密度較低劑量組及對照組增加，低劑量組與對照組無顯著性差異；②與分泌期相比，中高劑量組子宮內(nèi)膜ANGPT-1在增殖期的表達(dá)增加更明顯。結(jié)論：①中高劑量MXC可提高小鼠子宮內(nèi)膜組織血管生成素ANGPT-1蛋白的表達(dá)；②中高劑量組子宮內(nèi)膜ANGPT-1在增殖期的增加可能是呈雌激素依賴性，可能促進(jìn)子宮內(nèi)膜修復(fù)，也可能促進(jìn)異常子宮內(nèi)膜血管生成，如子宮內(nèi)膜

7、增生過長及子宮內(nèi)膜癌等；在分泌期的增加可能是通過使VSMC增殖而促進(jìn)螺旋動脈成熟和穩(wěn)定。
　　第三部分：甲氧滴滴涕染毒對小鼠子宮內(nèi)膜血管生成素-1mRNA表達(dá)水平的影響
　　動物染毒途徑及方法同實驗一，處死各組小鼠后迅速取出子宮內(nèi)膜組織，提取RNA。采用反轉(zhuǎn)錄多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（RT-PCR）的方法檢測ANGPT-1mRNA的表達(dá)水平，計算ANGPT-1mRNA相對含量。結(jié)果：MXC中高劑量組ANGPT-1mRNA相對含量明顯高