血必凈干預(yù)下百草枯中毒大鼠肺組織線粒體融合蛋白2及超微結(jié)構(gòu)變化的研究.pdf

1、百草枯(paraquat，PQ)對人毒性較高，是人類急性中毒病死率最高的除草劑。中毒后存活人群中絕大多數(shù)患者存在肺間質(zhì)纖維化。中毒發(fā)生的機(jī)制尚不完全清楚，一般認(rèn)為PQ為一種電子受體，作用于細(xì)胞內(nèi)的氧化還原反應(yīng)，生成大量活性氧自由基，引起細(xì)胞脂質(zhì)過氧化，造成組織細(xì)胞的氧化性損害，目前尚無肯定的特效解毒藥劑。 線粒體是細(xì)胞能量代謝的場所，細(xì)胞氧化功能的中心，其形態(tài)結(jié)構(gòu)、數(shù)量分布以及代謝反應(yīng)等均易受細(xì)胞內(nèi)、外環(huán)境的影響而發(fā)生明顯的變化

2、，這種變化在一定范圍內(nèi)是可逆的。因此，線粒體是細(xì)胞病變或損傷時(shí)最敏感的指標(biāo)之一，也是分子病理學(xué)檢查的重要依據(jù)。其中線粒體融合蛋白(mitofusin，Mfn)基因在線粒體的新陳代謝、凋亡和細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)等方面發(fā)揮重要作用，包括阻遏血管平滑肌細(xì)胞周期，抑制細(xì)胞增殖，遷移和重塑。線粒體融合蛋白2(Mfn2)定位于線粒體外膜，具有促進(jìn)線粒體融合的功能，并參與線粒體代謝調(diào)節(jié)。但Mfn2是否參與百草枯中毒肺組織細(xì)胞纖維化的形成仍有待研究。

3、目的： 本研究通過建立PQ中毒大鼠模型，采用western實(shí)驗(yàn)方法檢測中毒大鼠肺組織中Mfn2的表達(dá)情況，聯(lián)系透射電鏡察看肺組織超微結(jié)構(gòu)的變化趨勢，以組成膠原纖維之羥輔氨酸的含量和肺組織masson染色結(jié)果反映肺纖維化的治療結(jié)果，探討血必凈減輕百草枯中毒大鼠肺間質(zhì)纖維化的療效及百草枯致肺纖維化機(jī)制中又一可能的觸發(fā)點(diǎn)。 方法： 采用雄性Wistar大鼠，隨機(jī)分為PQ中毒組(PQ組)，PQ中毒+血必凈解救組(PX組)

4、和正常對照組(C組)三大組，每組設(shè)1d，3d，7d，14d四個(gè)觀察時(shí)間。其中PQ組對大鼠采取灌胃法造模(PQ50mg/kg)，C組給予1ml蒸餾水灌胃。PX組于染毒后30min給予血必凈腹腔注射4ml/kg，2次/d，間隔12h，PQ組和C組大鼠灌胃后30min以生理鹽水4ml/kg腹腔注射，2次/d。 于各觀察時(shí)間點(diǎn)第二次干預(yù)后30min處死大鼠，取肺組織樣本分別進(jìn)行Western蛋白電泳，羥輔氨酸定量，電鏡超微檢測及Mass

5、on，HE染色。 結(jié)果： (1)肺組織HE染色中PQ組3d時(shí)炎癥表現(xiàn)最重；7d以后，肺泡腔內(nèi)滲出液開始機(jī)化，成纖維細(xì)胞肥大，分泌纖細(xì)的膠原纖維，可見肺泡腔內(nèi)纖維化；14d成纖維細(xì)胞大量增生，肺泡結(jié)構(gòu)萎陷、破壞，膠原沉積，肺纖維化初步形成。各時(shí)點(diǎn)PX組病理變化較PQ組程度較輕。(2)Masson染色可見PQ組14d時(shí)肺纖維化程度明顯重于C組和PX組，染毒組肺泡炎、肺纖維化程度明顯高于C組。(3)PQ組7d，14d肺組織羥脯

6、氨酸(HYP)含量與C組相比明顯增高(P<0.01)。PX組與PQ組相比，7d，14d時(shí)HYP含量明顯低于PQ組(P<0.05)。(4)電鏡觀察：PQ組14d線粒體相對較少，多發(fā)生變性，腫脹和破壞；肺組織局部基膜卷折，肺泡塌陷，間質(zhì)膠原纖維增多，局部纖維化逐漸明顯；各種表現(xiàn)較PX組嚴(yán)重。(5)PX組Mfn2持續(xù)高表達(dá)，而PQ組各時(shí)點(diǎn)Mfn2表達(dá)逐漸升高，14d的表達(dá)量超出PX組，C組各時(shí)點(diǎn)表達(dá)量相對較低。 結(jié)論： 血必凈