米諾環(huán)素在L-谷氨酸誘導(dǎo)的視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞損傷中的保護(hù)作用和分子機(jī)制.pdf

1、目的:探討米諾環(huán)素在L-谷氨酸誘導(dǎo)的視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞損傷中的保護(hù)作用和分子機(jī)制。
　　 方法:體外實(shí)驗(yàn),原代小鼠視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞體外穩(wěn)定培養(yǎng)24h后,分為三組:對照組、L-谷氨酸組及L-谷氨酸+米諾環(huán)素組,相應(yīng)干預(yù)48h后分別觀察各組間神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的存活率及神經(jīng)軸突生長的差異。體內(nèi)實(shí)驗(yàn),將C57BL/6小鼠分為三組:對照組、L-谷氨酸組及L-谷氨酸+米諾環(huán)素組。前兩組小鼠腹腔內(nèi)注射生理鹽水(對照組,L-谷氨酸組),第三組腹腔內(nèi)注射

2、米諾環(huán)素(L-谷氨酸+米諾環(huán)素組,60mg/kg),每天一次,連續(xù)7天,第二天時(shí),第一組玻璃體腔內(nèi)注射生理鹽水,后兩組小鼠玻璃體腔內(nèi)注射2ul L-谷氨酸(2mM),誘導(dǎo)視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞損傷。第八天采用組織免疫熒光法技術(shù)和激光共聚焦顯微鏡觀察β3tubulin陽性細(xì)胞數(shù)及視網(wǎng)膜GFAP蛋白表達(dá)以評估視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的損傷情況。Real-time PCR和Western blot法分別檢測視網(wǎng)膜組織中IFN-γ,IL-1,TNF-α與GF

3、AP與Vimentin的mRNA及蛋白表達(dá)水平以初步探討損傷的分子機(jī)制。
　　 結(jié)果:體外實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:與對照組比較,L-谷氨酸組視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的存活率明顯降低,呈劑量和時(shí)間依賴性；神經(jīng)軸突生長受抑制。米諾環(huán)素干預(yù)后可明顯減輕L-谷氨酸導(dǎo)致的上述效應(yīng)(P<0.01)。動物實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,L-谷氨酸組小鼠神網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞數(shù)目較對照組小鼠顯著減少,視網(wǎng)膜組織中GFAP的表達(dá)量明顯增加(P<0.01)。米諾環(huán)素治療后可明顯改善L-谷氨