天青蛋白與p53蛋白共同作用誘發(fā)癌細胞及耐藥癌細胞凋亡.pdf

1、天青蛋白是由假單胞桿菌綠毒素分泌的一種細胞蛋白，屬于低分子量、可溶性的含銅蛋白，因此稱其為銅藍蛋白。以前的研究集中于天青蛋白在細胞氧化呼吸鏈中的作用，這種作用與其具有的氧化還原能力相關(guān)。但是最近幾年發(fā)現(xiàn)天青蛋白可以與腫瘤抑制蛋白p53形成復(fù)合物，穩(wěn)定和提高p53在胞內(nèi)的水平，同時產(chǎn)生高水平的活性氧ROS，由此導(dǎo)致細胞凋亡。已有文獻報道azurin能夠抑制裸鼠網(wǎng)狀瘤J774巨噬細胞增殖，誘導(dǎo)黑色素瘤UISO-Mel-2細胞及人乳腺癌的MC

2、F-7細胞凋亡。 為了解天青蛋白對中國人的口腔癌細胞及順鉑(DDP)耐藥細胞的作用，本研究成功利用大腸桿菌表達系統(tǒng)高效表達了綠膿桿菌氧化還原蛋白天青蛋白，采用兩種方法分別純化得到了純度較高的可溶性天青蛋白，以變性丙稀酰胺電泳和FPLC系統(tǒng)檢測其純度，在理化性質(zhì)上給予表征，將其作用于乳腺癌MCF-7細胞，檢測天青蛋白的促凋亡能力和細胞毒性，證實其細胞毒活性。而后我們將天青蛋白作用于可以表達野生型p53蛋白的兩種口腔癌細胞Acc2,

3、Acc3，并通過MTT毒性實驗，流式細胞檢測細胞凋亡實驗和瓊脂糖凝膠電泳研究其促進細胞凋亡的作用，同時通過免疫印記實驗考察其與p53的相互作用。結(jié)果表明，天青蛋白的加入穩(wěn)定和提高了細胞內(nèi)p53的表達，對口腔癌細胞產(chǎn)生了明顯的生長抑制和誘導(dǎo)凋亡作用。進一步的實驗證實其對順鉑(DDP)耐藥的A549肺癌細胞的凋亡也起到很明顯的促進作用。這揭示了azurin在腫瘤生物治療方面的應(yīng)用前景，為進一步研究其生物功能及在治療腫瘤方面尤其是在耐藥腫瘤細