懸浮生長細(xì)胞胞質(zhì)體制備的探討.pdf

1、目的：細(xì)胞重構(gòu)是研究核質(zhì)互換關(guān)系的必由途徑，而胞質(zhì)體(脫核后的“細(xì)胞”)的制備是其前提。貼壁生長細(xì)胞脫核技術(shù)相對成熟，懸浮生長細(xì)胞脫核難度較大。本實(shí)驗(yàn)旨在探討懸浮細(xì)胞胞質(zhì)體制備與純化的最佳條件，為后續(xù)的細(xì)胞重構(gòu)奠定基礎(chǔ)。 方法：①首先分別采用42％Percoll密度梯度離心法和88×g低速離心法純化懸浮生長的HL-60細(xì)胞。然后在細(xì)胞松弛素B(10μg/ml)介導(dǎo)下采用50％Percoll等密度梯度離心法分別在34℃和25℃環(huán)境

2、下對HL-60細(xì)胞進(jìn)行脫核制備胞質(zhì)體；②分別用37％、38％和40％Percoll密度梯度離心純化胞質(zhì)體；③應(yīng)用DAPI/CFSE熒光染料雙染色和瑞氏-姬姆薩染色對脫核率、胞質(zhì)體純度以及胞質(zhì)體的大小進(jìn)行鑒定。 結(jié)果：①34℃組3個(gè)批次實(shí)驗(yàn)脫核率均明顯高于25℃組相同批次的脫核率(P<0.01，P<0.05)。3個(gè)批次34℃組胞質(zhì)體直徑≥5μm百分比均明顯高于同一批次實(shí)驗(yàn)的25℃組(均P<0.01)。同一溫度下3批實(shí)驗(yàn)組間的脫核率

3、無差別(均P>0.05)，胞質(zhì)體直徑≥5μm百分比亦無差別(P>0.05)；②不同批次42％Percoll組間相比，其脫核率均無明顯差異(均P>0.05)；③不同批次42％Percoll密度梯度離心脫核后胞質(zhì)體純度明顯高于同一批次的低速離心組(P<0.01)；④37％和38％Percoll密度梯度離心純化，其純度分別為(95.80±0.22)％和(95.43±0.59)％，均高于40％Percoll組(88.84±1.59)％(P<0.