人乳腺癌線粒體基因突變及其意義的研究.pdf

1、背景：線粒體是細(xì)胞中能量生成、儲(chǔ)存、供給的場(chǎng)所。線粒體DNA(mitochodrialDNA，mtDNA)是獨(dú)立于細(xì)胞核DNA外的遺傳物質(zhì)，因缺乏組蛋白保護(hù)，且損傷修復(fù)系統(tǒng)不完善，容易成為致癌物攻擊的靶子。mtDNA復(fù)制控制區(qū)(又稱D-loop區(qū))是線粒體非編碼區(qū)中較為重要的區(qū)域，參與并調(diào)節(jié)mtDNA復(fù)制與轉(zhuǎn)錄，但是，mtDNA復(fù)制與轉(zhuǎn)錄并不是相互獨(dú)立的，而是存在著密切聯(lián)系，復(fù)制控制區(qū)的某些變化可能會(huì)引起mtDNA復(fù)制、轉(zhuǎn)錄的變化；cy

2、tb區(qū)是編碼氧化磷酸化呼吸鏈中復(fù)合體Ⅲ(泛醌-細(xì)胞色素C還原酶)中的1個(gè)亞基，基因進(jìn)化速度適中，比較穩(wěn)定，近年來(lái)許多與疾病有關(guān)的線粒體DNA特異性突變?cè)诰€粒體基因穩(wěn)定區(qū)域不斷被發(fā)現(xiàn)，為疾病的診斷和研究提供了可靠的依據(jù)。 目的：檢測(cè)乳腺癌患者線粒體DNAD-loop環(huán)HV2區(qū)體細(xì)胞性突變并探討它在腫瘤發(fā)生中的作用；檢測(cè)線粒體DNAcytb區(qū)基因在同一乳腺癌患者癌、癌旁組織及血液基因變異情況，尋找特異性位點(diǎn)。 方法：采用聚合

3、酶鏈反應(yīng)(PCR)，基因測(cè)序方法對(duì)延邊醫(yī)院7例浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌、4例乳腺纖維腺瘤患者的癌組織進(jìn)行線粒體DNA非編碼區(qū)D-loop環(huán)高突變HV2區(qū)部分序列突變分析；對(duì)20例乳腺癌患者的癌、癌旁組織、血液進(jìn)行線粒體DNA編碼區(qū)cytb區(qū)采用聚合酶鏈反應(yīng)-單鏈構(gòu)像多態(tài)性分析，有異常條帶的7例患者所有標(biāo)本進(jìn)行基因測(cè)序分析。 結(jié)果：(1)11例HV2區(qū)測(cè)序標(biāo)本中，共檢測(cè)到47個(gè)新的突變位點(diǎn)，其中有3個(gè)屬于微衛(wèi)星不穩(wěn)定性，6例移碼突變，其余為點(diǎn)

4、突變。8個(gè)位點(diǎn)位于復(fù)制和轉(zhuǎn)錄的區(qū)域。 (2)經(jīng)PCR-SSCP檢測(cè)，20例乳腺癌mtDNA共發(fā)現(xiàn)7例出現(xiàn)異常條帶，測(cè)序結(jié)果顯示，6個(gè)位點(diǎn)突變發(fā)生率較高：nt15326A→G；nt14766C→T；nt15301G→A；nt15043G→A；14783T→C；nt15402C→T突變率分別為91％(20/21)；81％(17/21)；52％(11/21)；48％(10/21)；43％(9/21)；35％(7/21)。 結(jié)論

5、：(1)線粒體DNAHV2區(qū)是一個(gè)高度多態(tài)性和突變性的區(qū)域，在乳腺癌中突變率較高，可能是乳腺癌突變的熱點(diǎn)，該區(qū)突變可能在乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展中發(fā)揮重要作用。 (2)6個(gè)高突變發(fā)位點(diǎn)：nt15326A→G；nt14766C→T；nt15301G→A；nt15043G→A；14783T→C；nt15402C→T突變可能與線粒體的損傷有關(guān)，它們可能為乳腺癌的診斷和線粒體功能評(píng)價(jià)提供有價(jià)值的參考。nt14766C→T；nt15402C→T