DEN2感染對MyD88沉默的小鼠樹突狀細胞表達相關膜分子及炎癥因子分泌的影響.pdf

1、目的：通過 DEN2感染髓樣分化因子88（Myeloid Differentiation Factor88，MyD88）沉默的小鼠骨髓來源樹突狀細胞（Bone Marrow-derived Dendritic Cells，BMDC），分析MyD88在DEN2感染BMDC后對其成熟及相關炎癥因子分泌的影響。
　　方法：利用rmIL-4、rmGM-CSF聯(lián)合誘導培養(yǎng)BMDC，通過細胞染色及流式細胞術鑒定；針對 BMDC MyD88基因

2、，設計并合成3對 MyD88 siRNA，脂質體法轉染 BMDC；通過Western blot篩選一對高沉默效率的MyD88 siRNA；常規(guī)方法增殖及鑒定DEN2；直接免疫熒光及 RT-PCR鑒定 DEN2吸附 BMDC；流式細胞術分析對照組、感染組、RNAi組、感染 RNAi組、無義 RNAi組 BMDC膜表面分子 CD86、MHC-II的表達，雙抗體夾心ELISA法檢測上清液中IP-10、TNF-α及IFN-α的分泌水平。

3、　　結果：
　　1.聯(lián)合誘導培養(yǎng)至第5d后的BMDC具有典型的DC形態(tài)，流式細胞術檢測 CD11c、CD86和MHC-II分子的表達百分率分別為70.85±2.66％、28.21±5.21%、44.69±3.88%，為相對未成熟的BMDC。
　　2.與空白對照組相比，序列1、2、3組的MyD88蛋白質表達率分別降低60.8%、78.9%、81.9%；其中序列3的沉默效率最高，具有顯著統(tǒng)計學意義（P＜0.01）。
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4、. DEN2可吸附BMDC，與對照組比較，感染組DC膜表面分子CD86表達降低，MHC-II分子增高。與正常對照組比較，DEN2感染RNAi組BMDC的MHC-II分子表達無明顯變化，而共刺激分子 CD86表達增高。DEN2感染RNAi組與無義RNAi組比較，無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。與RNAi組比較，DEN2感染RNAi組細胞表達CD86及MHC-II無明顯變化。
　　4. DEN2感染組與對照組比較，TNF-α、IFN-α

5、及IP-10的水平均增高。與正常組相比，無義RNAi組DC分泌的IP-10及TNF-α的水平增高，且有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。與對照組比較，感染RNAi組IP-10、IFN-α無明顯變化，而TNF-α分泌增加，且有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。與RNAi組比較，感染RNAi組IP-10及IFN-α水平無變化，TNF-α水平有所增高，但無統(tǒng)計學意義（P=0.76）。
　　結論：
　　1.DEN2可吸附BMDC，并促使其成熟及