Tca8113-4-1BBL細胞聯(lián)合CD28單抗在口腔鱗癌免疫中的作用.pdf

1、目的:在細胞水平，研究口腔癌瘤苗TCV-4-1BBL 聯(lián)合CD28 單克隆抗體(CD28 mAb)誘導T 淋巴細胞抗腫瘤活性的能力。
　　 方法:1.建立穩(wěn)定表達4-1BBL克隆細胞株：通過脂質(zhì)體法將真核載體pEGFP-4-1BBL轉(zhuǎn)染人口腔鱗癌細胞Tca8113，經(jīng)G418（400μg/ml）篩選及有限稀釋后獲得穩(wěn)定高表達4-1BBL克隆細胞株Tca8113-4-1BBL，分別用RT-PCR和Western blot檢測轉(zhuǎn)染細

2、胞中4-1BBL mRNA和蛋白的表達。2.制備瘤苗：將轉(zhuǎn)染與未轉(zhuǎn)染4-1BBL基因的Tca8113細胞用絲裂霉素C（MMC）處理后，制成腫瘤細胞瘤苗,分別命名TCV-4-1BBL、TCV-Tca8113。3. TCV-4-1BBL瘤苗聯(lián)合CD28mAb誘導抗腫瘤活性的能力： TCV-4-1BBL聯(lián)合CD28 mAb與經(jīng)體外CD3單克隆抗體（CD3mAb）誘導的人外周血T淋巴細胞共同培養(yǎng)，實驗分四組，①Tca8113組：T淋巴細胞+TC

3、VTca8113;②Tca8113+CD3 mAb組： T淋巴細胞+CD3 mAb+TCV-Tca8113; ③Tca8113-4-1BBL+CD3 mAb組：T淋巴細胞+CD3 mAb+TCV- 4-1BBL; ④Tca8113-4-1BBL+CD3 mAb組+CD28 mAb：T淋巴細胞+CD3 mAb+TCV- 4-1BBL+CD28 mAb。各實驗組培養(yǎng)72小時后，臺盼藍染色計數(shù)T細胞、用Cell Counting Kit-8（

4、CCK-8）測細胞毒性T細胞（CTL）殺傷活性，ELISA法檢測細胞因子IL-2、IFN-γ的分泌。
　　 結(jié)果；1. 熒光顯微鏡下觀測到轉(zhuǎn)染了pEGFP-4-1BBL的Tca8113 細胞（Tca8113 -4-1BBL）綠色熒光蛋白的表達，RT-PCR、western blot 在mRNA和蛋白水平檢測到4-1BBL 表達。2.72h后臺盼藍染色計數(shù)上述混合培養(yǎng)的T 細胞，④組1.78±0.16，高于①組0.917±0.12

5、，②組1.01±0.14 及③組1.38±0.15，P<0.05，促進T 細胞的增殖。3. 72h后測CTL的殺傷活性：④組59.2±5.1，高于②組25.7±3.5 及③組38.9± 3.4，P<0.05，促進T 細胞的活化。4. 72h后各組IL-2的分泌：④組881.2131±78，顯著高于①組56.1619 ±13，②組176.4235±33，③組526.1235±67，P<0.05，促進IL-2分泌。5. 72h后各組IFN-

6、γ的分泌：④組402.81±34高于其他各組（②組（69.83±13），③組246.87±24，①組37.85±11），促進IFN-γ的分泌。
　　 結(jié)論：pEGFP/neo-4-1BBL 真核表達載體在Tca8113細胞中獲得穩(wěn)定表達，口腔癌瘤苗Tca8113-4-1BBL構(gòu)建成功。在細胞水平顯示，TCV- 4-1BBL瘤苗聯(lián)合CD28 mAb，能增強T細胞抗腫瘤免疫功能，促進T細胞增殖、活化，促進IL-2、IFN-γ分泌可能