低氧對肺動脈平滑肌細胞腺苷A2b受體表達的影響及其作用機制研究.pdf

1、[目的]
　　本研究擬通過培養(yǎng)大鼠肺動脈平滑肌細胞(PASMCs)，檢測低氧下PASMCs腺苷A2bAR和PCNA mRNA表達情況，研究低氧對腺苷A2bAR的影響，運用PI3K特異性抑制劑LY294002處理細胞，探討HIMF/PI3K/Akt通路對低氧誘導A2bAR表達的作用。
　　[方法]
　　1.采用組織塊貼壁法原代培養(yǎng)PASMCs，免疫熒光法鑒定細胞;用真空壓縮袋制作常壓低氧培養(yǎng)細胞的模擬模型裝置（氧濃度為2

2、％），通過檢測細胞增殖來驗證該設(shè)計的可行性。
　　2.實驗分組:設(shè)實驗組[即低氧組(Hypoxia，H組)]和對照組[即常氧組(Normal,N組)]，每組均設(shè)時間點為6h、24h、48h、72h。
　　3.用流式細胞術(shù)檢測低氧6h、24h、48h、72h PASMCs增殖情況。
　　4.應用qRT-PCR法檢測常氧和低氧6h、24h、48h、72h PASMCs A2bAR和PCNA mRNA的表達情況。
　　

3、5.采用免疫熒光的方法，在激光共聚焦顯微鏡下觀察PI3K特異性抑制劑LY294002在1umol/L、10umol/L、25umol/L、50umol/L濃度下對A2bAR在PASMCs上的表達影響。
　　[結(jié)果]
　　1.流式細胞術(shù)檢測PASMCs增殖結(jié)果顯示，培養(yǎng)6h、24h、48h、72h后常氧組和低氧組的PASMCs增殖差異性有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。
　　2.qRT-PCR法檢測常氧和低氧組A2bAR和P

4、CNA mRNA表達顯示，常氧組A2bAR和PCNA mRNA表達均呈現(xiàn)先上升后下降趨勢(F=200.170，P＜0.05;F=56.271，P＜0.05)，而低氧組呈現(xiàn)先上升再下降后上升趨勢(F=102.729，P＜0.05;F=172.038，P＜0.05)。
　　3.激光共聚焦顯微鏡下觀察到隨著LY294002濃度的增加，常氧下A2bAR的熒光表達強度有逐漸下降趨勢，但趨勢極小，而低氧下A2bAR的熒光表達強度則有明顯下降趨