低氧對大鼠肺動脈平滑肌細胞膜腺苷A2b受體表達影響的研究.pdf

1、[目的]
　　 本研究擬通過體外培養(yǎng)肺動脈平滑肌細胞(PASMCs)、設計并建立低氧培養(yǎng)細胞模型和不同低氧時間不同藥物處理PASMCs,研究低氧對PASMCs增殖、腺苷A2b受體(A2bAR)表達變化及其激動劑對細胞增殖的影響,從而為腺苷類藥物治療HPH提供理論依據(jù)和指導。
　　 [方法]
　　 1.采用組織塊貼壁法原代培養(yǎng)PASMCs,免疫組化法鑒定細胞。
　　 2.用真空壓縮袋制作低氧培養(yǎng)細胞的模擬模

2、型裝置,測定細胞增殖來驗證該設計的可行性。
　　 3.實驗分組:首先設空白組、實驗組和對照組,然后隨機分為低氧組(Hypoxia,H組)和常氧組(Normal,N組),將H組和N組分別進行A2bAR非特異性激動劑(CV-1808)和A2bAR特異性拮抗劑(MRS1754)處理后在不同環(huán)境培養(yǎng),時間點設為0h、6h、24h、48h、72h。
　　 4.采用免疫熒光的方法,在激光共聚焦顯微鏡下觀察低氧不同時間下A2bAR在P

3、ASMCs上的分布情況和表達量的變化,及PASMCs的形態(tài)變化。
　　 5.用Cell Counting試劑盒(CCK-8法)檢測低氧不同時間經(jīng)不同藥物處理的PASMCs的增殖變化情況。
　　 [結果]
　　 1.原代培養(yǎng)的PASMCs傳代后穩(wěn)定性好,純度高可達99％以上,免疫組化鑒定α-actin呈強陽性表達。
　　 2.激光共聚焦顯微鏡下觀察到,低氧下PASMCs有從長梭過度到短梭形的趨勢,未出現(xiàn)典型

4、生長方式,不出現(xiàn)或遲于常氧培養(yǎng)細胞出現(xiàn)凋亡。
　　 3.免疫熒光法檢測到A2bAR在PASMCs胞膜、胞漿均有表達,胞膜表達稍多。低氧下A2bAR表達增加,具有時間依賴性,但是持續(xù)時間較短。
　　 4.CCK-8法結果顯示,低氧下細胞增殖明顯高于常氧(P＜0.0001),低氧下CV-1808處理組可顯著抑制細胞增殖(P＜0.0001)。
　　 [結論]
　　 1.低氧下PASMCs形態(tài)和生長方式改變,提示