藥物和低劑量照射干預(yù)哮喘免疫調(diào)節(jié)機(jī)制的探討.pdf

1、支氣管哮喘是由多種細(xì)胞和細(xì)胞組分參與的氣道慢性變態(tài)反應(yīng)性炎癥，引起氣道高反應(yīng)性，導(dǎo)致可逆性氣道阻塞性疾病。在哮喘的發(fā)病機(jī)制中，其細(xì)胞因子網(wǎng)絡(luò)十分復(fù)雜。任何對細(xì)胞因子或者網(wǎng)絡(luò)中的某一環(huán)節(jié)產(chǎn)生影響的藥物或干預(yù)措施可影響哮喘的嚴(yán)重程度及預(yù)后。呼吸道病毒感染是年幼兒童急性喘息發(fā)作最常見的誘因，而細(xì)菌脂多糖可能是保護(hù)因素。
　　 目的：
　　 1.建立哮喘模型，從肺組織病理改變、高遷移率族蛋白B-1(HMGB1)等細(xì)胞因子的變化研

2、究哮喘的免疫發(fā)病機(jī)制，探討吸入性糖皮質(zhì)激素和白三烯受體拮抗劑對其影響，評價兩者的抗炎效果。
　　 2.低劑量照射對機(jī)體的效應(yīng)隨劑量不同而不同，研究低劑量照射對卵白蛋白(OVA)激發(fā)的哮喘小鼠肺組織病理、HMGB1等細(xì)胞因子的影響，探討低劑量照射對哮喘小鼠的免疫調(diào)節(jié)作用。
　　 3.檢測不同病原感染后支氣管肺炎嬰幼兒外周血HMGB1mRNA表達(dá)水平及CRP、WBC計數(shù)、免疫球蛋白、T細(xì)胞亞群，分析其相關(guān)性，研究HMGB1在

3、支氣管肺炎的臨床意義。
　　 方法：
　　 1.使用OVA，建立小鼠過敏性哮喘模型，給予吸入性糖皮質(zhì)激素布地奈德和白三烯受體拮抗劑孟魯斯特進(jìn)行干預(yù)，逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)法(RT-PCR)檢測各組小鼠肺組織HMGB1 mRNA的表達(dá)，免疫組化標(biāo)記肺組織HMGB1、IL-1β、IL-6、IL-10、TLR4蛋白的表達(dá)。
　　 2.OVA致敏后的小鼠給予低劑量X射線全身照射(20mGy-400mGy)，再激發(fā)建立哮喘模型

4、，RT-PCR檢測各組肺組織小鼠HMGB1、TNF-α mRNA的表達(dá)，免疫組化標(biāo)記肺組織IL-1β、IL-6、IL-10蛋白的表達(dá)。
　　 3.檢測不同病原感染后支氣管肺炎患兒外周血的13個指標(biāo)：RT-PCR檢測外周血HMGB1mRNA的表達(dá)，流式細(xì)胞儀檢測外周血T細(xì)胞亞群，間接酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測外周血免疫球蛋白(IgA、IgG、IgM)，夾層酶聯(lián)免疫分析C-反應(yīng)蛋白(CRP)，用細(xì)胞計數(shù)器進(jìn)行白細(xì)胞(WBC)計

5、數(shù)。分析13個指標(biāo)相關(guān)性及預(yù)測病原菌95％可信區(qū)間曲線下面積。
　　 結(jié)果：
　　 1.吸入性糖皮質(zhì)激素和白三烯受體拮抗劑治療后哮喘小鼠肺組織炎癥較哮喘組減輕。哮喘組肺組織HMGB1的表達(dá)較對照組增高，第二周出現(xiàn)高峰。吸入性糖皮質(zhì)激素治療后HMGB1的表達(dá)第一周出現(xiàn)高峰，然后逐漸減少：白三烯受體拮抗劑治療后HMGB1的表達(dá)第二周出現(xiàn)高峰。兩者不同程度地減少了IL-1β、IL-6的表達(dá)，增加IL-10、TLR4的表達(dá)。

6、r>　　 2.在OVA激發(fā)小鼠哮喘模型組增加了低劑量X射線全身照射(20mGy-400mGy)后，HE染色示OVA+70mGy組肺組織炎癥較輕。OVA+50mGy和OVA+70mGy組與OVA+20mGy組相比，TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-10的表達(dá)逐漸增強(qiáng)，HMGB1的表達(dá)降低，OVA+100mGy、OVA+200mGy和OVA+400mGy組的TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-10的表達(dá)下降，HMGB1的表達(dá)增強(qiáng)

7、。
　　 3.支氣管肺炎患兒外周血HMGB1的表達(dá)：以1.0256為切點(diǎn)，HMGB1對診斷是混合感染還是單一感染的靈敏度為88.0％，特異度為67.9％；以0.7472為切點(diǎn)，HMGB1對診斷是細(xì)菌感染還是病毒感染的靈敏度為73.1％，特異度為11.1％。HMGB1與WBC、CRP、IgM、CD3+、CD4+CD25+細(xì)胞之間的相關(guān)性有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。病毒感染組HMGB1的表達(dá)低于健康對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0

8、.05)，細(xì)菌感染組稍高于健康對照組。
　　 結(jié)論：
　　 1.HMGB1參與了哮喘的氣道炎癥反應(yīng)，吸入性糖皮質(zhì)激素布地奈德對細(xì)胞因子HMGB1、IL-1β、IL-6、IL-10、TLR4的影響較白三烯受體拮抗劑孟魯司特明顯，推測吸入性糖皮質(zhì)激素抗過敏性炎癥作用優(yōu)于白三烯受體拮抗劑。
　　 2.低劑量照射對哮喘小鼠的效應(yīng)隨劑量不同而不同，50-70mGy低劑量誘導(dǎo)興奮效應(yīng)的產(chǎn)生，100-400mGy導(dǎo)致免疫功能的