DmMAGE、Dmp53與一種新的果蠅蛋白CG13142相互作用研究.pdf

1、自1991年Van der Bruggen等人首次發(fā)現(xiàn)MAGE—1抗原以來，在人類細(xì)胞中已發(fā)現(xiàn)25個(gè)MAGE同源基因。目前關(guān)于MAGE蛋白在腫瘤特異性免疫治療方面已進(jìn)行了大量的研究，但對(duì)于該蛋白家族在正常生命活動(dòng)中的功能依然知之甚少。 根據(jù)果蠅蛋白相互作用數(shù)據(jù)庫分析結(jié)果，我們克隆并鑒定了果蠅DmMage及與其相互作用的基因CG13142。通過制備針對(duì)這兩種蛋白的多克隆抗體，分別檢測(cè)了這兩個(gè)基因在果蠅發(fā)育中的表達(dá)水平、組織學(xué)分

2、布及其細(xì)胞定位。結(jié)果表明：果蠅DmMage基因在正常組織中(尤其是神經(jīng)系統(tǒng))表達(dá)，其主要分布在胞漿中；CG13142不僅分布在胞質(zhì)中，在核內(nèi)亦可檢測(cè)到呈散在不均一分布，未見與染色質(zhì)DNA共定位，在胚胎發(fā)育后期主要存在于花環(huán)細(xì)胞(garland cell)中，成蟲盤、蛹及成蟲中均有低水平表達(dá)。 為了了解這兩個(gè)基因的在體功能，我們分別構(gòu)建了DmMage及CG13142基因的過表達(dá)轉(zhuǎn)基因果蠅。在與各種全身性或組織特異性表達(dá)的GAL

3、4果蠅雜交后，并未發(fā)現(xiàn)明顯的表型變化。但是當(dāng)這兩株果蠅分別與LJAS—Dmp53共同驅(qū)動(dòng)后，發(fā)現(xiàn)它們可以不同程度地挽救Dmp53的致死效應(yīng)。在Dmp53缺陷的果蠅中CG13142蛋白的表達(dá)量明顯升高：而當(dāng)Dmp53過量表達(dá)時(shí)，CG13142的蛋白量則有所下降。GST pull down實(shí)驗(yàn)以及免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)則顯示CG13142可以與Dmp53發(fā)生直接相互作用。提示：CG13142的過表達(dá)可以部分抑制Dmp53的過表達(dá)效應(yīng)，其本身可能也受