以TLR7激動劑為佐劑免疫治療粉塵螨過敏性哮喘模型的研究.pdf

1、過敏性哮喘是一種以氣道炎癥為特征的慢性疾病，主要由抗原特異性Th2型細(xì)胞產(chǎn)生的細(xì)胞因子分泌失調(diào)引起。研究表明刺激Toll樣受體7(TLR7)不僅能夠觸發(fā)抗病毒反應(yīng)，還能夠減輕試驗(yàn)性的過敏性哮喘。在本研究中，我們將一種新化學(xué)合成的多功能TLR7激動劑(TLR7a)結(jié)合到粉塵螨抗原重組Der f1蛋白上，用來免疫治療粉塵螨過敏性哮喘小鼠，研究此新型疫苗的免疫調(diào)節(jié)效果和分子機(jī)制。
　　方法:首先構(gòu)建TLR7a-Derf1疫苗。根據(jù)蛋白質(zhì)

2、在280nm處的紫外吸收峰測定TLR7a-Der f1的偶聯(lián)度。SDS-PAGE和圓二色譜分析蛋白結(jié)構(gòu)是否發(fā)生改變。分別用Western-blot和ELISA檢測TLR7a-Der f1的免疫原性和免疫抗原性。然后用粉塵螨粗蛋白致敏小鼠建立過敏性哮喘模型。免疫治療后，立即評估小鼠氣道高反應(yīng)性(AHR)，檢測血清中特異性IgE、IgG2a和IgG1抗體的水平，收集肺泡灌洗液和脾細(xì)胞培養(yǎng)上清檢測Th1/Th2型細(xì)胞因子的表達(dá)（IL-4、IL

3、-10、IFN-γ和IL-12），觀察肺組織的病理學(xué)變化。
　　結(jié)果:TLR7a-Derf1疫苗構(gòu)建成功。TLR7a與Der f1蛋白的共價結(jié)合摩爾比率為5∶1，偶聯(lián)后TLR7a-Der f1的一級結(jié)構(gòu)和二級結(jié)構(gòu)并沒有改變，TLR7a-Derf1疫苗的免疫原性和免疫抗原性依然存在，可以用于下一步的免疫治療。Der f1和TLR7a-Derf1疫苗治療后的小鼠在激發(fā)后，氣道高反應(yīng)性、肺部炎癥和BALF中嗜酸性粒細(xì)胞炎癥都有所減輕。此

4、外，Derf1和TLR7a-Derf1治療組血清特異性IgE反應(yīng)降低，特異性IgG2a和IgG1反應(yīng)升高。Der f1和TLR7a-Der f1都有抑制過敏性哮喘的效果，但TLR7a-Derf1的療效要更好。TLR7a-Der f1治療組脾細(xì)胞培養(yǎng)上清和BALF中IL-4水平顯著降低，IFN-γ和IL-12水平升高，而TLR7a-Der f1并不能像Der f1一樣介導(dǎo)IL-10分泌。TLR7a+Der f1對過敏性哮喘也有一定的治療作