基于超聲支氣管鏡活檢技術(shù)的肺癌分子診療新模式初探.pdf

1、第一部分 EBUS-TBNA技術(shù)在胸部腫瘤精確診斷中的應(yīng)用
　　背景: 肺癌的精確診斷和分期是規(guī)范化治療的重要前提。近年來(lái)興起的氣管內(nèi)超聲引導(dǎo)針吸活檢技術(shù)(endobronchial ultrasound-guided transbronchial needleaspiration，EBUS-TBNA)是一種用于診斷縱隔、肺門(mén)淋巴結(jié)以及胸部疾病的微創(chuàng)方法，具有經(jīng)濟(jì)便捷、可反復(fù)活檢、獲取組織量大等多種優(yōu)勢(shì)，本研究旨在探討其在胸部腫瘤

2、精確診斷分期中的應(yīng)用價(jià)值。
　　方法: 回顧性地分析2012年04月-2014年12月期間，就診于江蘇省腫瘤醫(yī)院胸外科的患者資料，包括住院部和門(mén)診病人，胸部CT或PET/CT檢查提示縱隔占位或縱隔及肺門(mén)淋巴結(jié)腫大≥1cm，所有患者行EBUS-TBNA檢查，陰性者進(jìn)一步接受縱隔鏡檢查或胸腔鏡、開(kāi)胸手術(shù)明確病變性質(zhì)。對(duì)患者的病理學(xué)檢查結(jié)果、對(duì)病變的準(zhǔn)確率，靈敏度，特異度等指標(biāo)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。
　　結(jié)果: 本組共426例病例，EBU

3、S-TBNA明確淋巴結(jié)惡性轉(zhuǎn)移者378例，其中診斷為小細(xì)胞肺癌113例;非小細(xì)胞肺癌251例;EBUS-TBNA陰性者48例，其中10例最終證實(shí)為非小細(xì)胞肺癌的縱隔淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，2例為小細(xì)胞肺癌，其余36例為良性病變。EBUS-TBNA在縱隔病變或縱隔淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移診斷中的準(zhǔn)確性、特異性和靈敏度分別為93.4％，100％，96.7％。其中70歲以下患者229例，70歲以上患者197例，檢查過(guò)程中，患者耐受性均較好，70歲以下患者與70歲以上患

4、者組，并發(fā)癥發(fā)生的概率無(wú)明顯差異。所有病人均無(wú)嚴(yán)重并發(fā)癥發(fā)生。
　　結(jié)論: 在以肺癌為主的胸部腫瘤的精確診斷分期中，EBUS-TBNA是一種安全的新型微創(chuàng)診斷技術(shù)平臺(tái)，具有很高的靈敏度、特異性和準(zhǔn)確性，與縱隔鏡相比更安全、經(jīng)濟(jì)、快捷，有望逐步取代其成為肺癌精確分期的金標(biāo)準(zhǔn)。
　　第二部分基于EBUS-TBNA獲得的肺癌原發(fā)及轉(zhuǎn)移灶標(biāo)本驅(qū)動(dòng)基因突變譜對(duì)比研究
　　背景: 當(dāng)前肺癌的治療模式已由單純“規(guī)范化”診療模式向“規(guī)

5、范化”與“個(gè)體化”并重治療模式轉(zhuǎn)變。個(gè)體化精準(zhǔn)醫(yī)學(xué)(personalization and precisionmedicine，PPM)要求在精確診斷和分期的基礎(chǔ)上，對(duì)肺癌患者的分子特征進(jìn)行不同部位連續(xù)、動(dòng)態(tài)的觀察。如何同時(shí)獲取原發(fā)及轉(zhuǎn)移灶等不同部位、同一患者不同時(shí)間、且同時(shí)滿足病理及分子診斷的組織樣本，是當(dāng)前困擾臨床醫(yī)生的難題之一。本研究旨在研究基于EBUS-TBNA技術(shù)獲取肺癌原發(fā)及轉(zhuǎn)移灶樣本的驅(qū)動(dòng)基因突變譜差異，探討EBUS-TB

6、NA技術(shù)在肺癌個(gè)體化分子診療中的應(yīng)用價(jià)值。
　　方法: 利用EBUS-TBNA技術(shù)，穿刺獲得8例肺癌患者原發(fā)灶和匹配的轉(zhuǎn)移灶。二代測(cè)序獲得原發(fā)灶及轉(zhuǎn)移灶的驅(qū)動(dòng)基因突變譜，針對(duì)上述數(shù)據(jù)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析及生物信息學(xué)分析，探索肺癌原發(fā)灶及轉(zhuǎn)移灶驅(qū)動(dòng)基因表達(dá)譜層面的共性及異質(zhì)性，并結(jié)合病例分析其臨床應(yīng)用價(jià)值。
　　結(jié)果: 8例患者匹配組織中共檢測(cè)中313個(gè)突變，其中65個(gè)為頻發(fā)突變（原發(fā)灶32個(gè)，轉(zhuǎn)移灶33個(gè)），其中TP53突變出現(xiàn)最頻

7、繁。針對(duì)原發(fā)灶和轉(zhuǎn)移灶65個(gè)頻發(fā)突變和248個(gè)可能的“過(guò)客”基因變異對(duì)比分析提示原發(fā)灶和轉(zhuǎn)移灶發(fā)生的整體頻發(fā)變異一致性為94％，疑似“過(guò)客”突變重合率為63％。EBUS-TBNA的多位置動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)分析成功的指導(dǎo)了肺癌患者的治療（4號(hào)患者）。KEGGpathway分析顯示同時(shí)出現(xiàn)在原發(fā)灶和轉(zhuǎn)移灶中的變異基因主要富集在與腫瘤發(fā)生密切相關(guān)的RAS通路、TP53通路和MYC通路;僅在原發(fā)灶中發(fā)生變異的基因主要富集在PI3K通路和AR通路;僅在轉(zhuǎn)移

8、灶發(fā)生變異的基因主要富集在FGFR、CDH1(E-cadherin)及TGF-β通路。
　　結(jié)論: EBUS-TBNA技術(shù)平臺(tái)可提供滿足病理檢測(cè)及全基因組二代測(cè)序所需高質(zhì)量組織樣本，并在多部位、動(dòng)態(tài)的多次獲取組織對(duì)驅(qū)動(dòng)基因突變進(jìn)行監(jiān)測(cè)方面具有重要價(jià)值?；贓BUS-TBNA技術(shù)獲得的肺癌原發(fā)灶及轉(zhuǎn)移灶驅(qū)動(dòng)基因突變譜對(duì)比發(fā)現(xiàn):盡管超過(guò)90％的驅(qū)動(dòng)基因突變相同，但轉(zhuǎn)移灶仍有不同于原發(fā)灶的重要驅(qū)動(dòng)基因突變，可能是導(dǎo)致肺癌靶向治療耐藥或

9、進(jìn)展的關(guān)鍵原因。
　　第三部分基于EBUS-TBNA獲取標(biāo)本的肺癌轉(zhuǎn)移相關(guān)長(zhǎng)非編碼RNA篩選及功能研究
　　背景: 肺癌的發(fā)病機(jī)制研究在基因組水平已獲得了很大進(jìn)展，但NSCLC患者5年總體生存率仍徘徊于20-30％。前期我們利用EBUS-TBNA技術(shù)分析比較肺癌原發(fā)灶及轉(zhuǎn)移灶的驅(qū)動(dòng)基因突變譜。而后基因組時(shí)代，RNA組學(xué)逐漸成為研究熱點(diǎn)。其中，長(zhǎng)非編碼RNA(long non-coding RNA，lncRNA)在多種生物進(jìn)程

10、和疾病進(jìn)展中發(fā)揮重要作用，例如免疫反應(yīng)、細(xì)胞分化、代謝、腫瘤發(fā)生及發(fā)展。本研究旨在通過(guò)比較原發(fā)灶及轉(zhuǎn)移灶之間的轉(zhuǎn)錄組表達(dá)譜差異可快速有效的篩選出調(diào)控肺癌侵襲轉(zhuǎn)移的關(guān)鍵基因。
　　方法: EBUS-TBNA獲取3對(duì)肺癌原發(fā)灶及轉(zhuǎn)移灶組織，利用lncRNA/mRNA共表達(dá)芯片技術(shù)，并結(jié)合生物信息學(xué)分析篩選鑒定出功能未知的lncRNALINC00313。qPCR分析LINC00313在62對(duì)NSCLC組織的表達(dá)譜及與臨床病理資料的相關(guān)性

11、，同時(shí)行劃痕試驗(yàn)、transwell實(shí)驗(yàn)、Matrigel實(shí)驗(yàn)體內(nèi)研究LINC00313對(duì)NSCLC細(xì)胞遷移侵襲的影響。
　　結(jié)果: 相對(duì)于肺癌原發(fā)灶，轉(zhuǎn)移灶肺癌中mRNA和lncRNA的表達(dá)存在很大差異，而這些差異表達(dá)基因與腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移、細(xì)胞增值、細(xì)胞凋亡等功能相關(guān)。其中，LINC00313在NSCLC組織中表達(dá)上調(diào)，且高表達(dá)的LINC00313與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和晚期NSCLC顯著相關(guān)。體內(nèi)實(shí)驗(yàn)顯示LINC00313可以通過(guò)介導(dǎo)MM

12、P9表達(dá)促進(jìn)NSCLC的遷移侵襲。
　　結(jié)論: 肺癌原發(fā)灶及轉(zhuǎn)移灶中編碼基因和長(zhǎng)非編碼基因的表達(dá)存在很大差異。LINC00313是一個(gè)新發(fā)現(xiàn)的表達(dá)上調(diào)的NSCLC相關(guān)lncRNA，且高表達(dá)的LINC00313與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和晚期NSCLC顯著相關(guān)。LINC00313能夠介導(dǎo)調(diào)控MMP9表達(dá)參與NSCLC的侵襲轉(zhuǎn)移，是潛在的預(yù)測(cè)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的生物標(biāo)志物。
　　綜上所述，在當(dāng)前“規(guī)范化”與“個(gè)體化”并重的肺癌診療模式下，基于EBUS