病毒疫苗微膠囊化技術(shù)平臺的建立及應(yīng)用研究.pdf

1、微膠囊疫苗是一種運(yùn)用可降解生物材料和微膠囊化技術(shù)改進(jìn)現(xiàn)有疫苗的劑型和投遞方式，從而保護(hù)抗原、簡化接種程序、增強(qiáng)免疫效果的新型可控緩釋疫苗。因此，進(jìn)行病毒疫苗微膠囊化的研究，將有望克服傳統(tǒng)疫苗免疫原性弱、體內(nèi)降解和消除快、生物利用度低的不足，更有效地預(yù)防和控制病毒性傳染病。 本研究分別選擇滅活SARS冠狀病毒、乙型肝炎疫苗、轉(zhuǎn)染SARS冠狀病毒N蛋白和Flt3配體基因編碼序列的基因工程細(xì)胞和質(zhì)粒DNA作為全細(xì)胞疫苗、蛋白亞單位疫苗

2、、抗原工程疫苗和DNA疫苗的模型，應(yīng)用微膠囊化技術(shù)對它們進(jìn)行了劑型改換；在對微膠囊載體材料及制備方法進(jìn)行研究的基礎(chǔ)上，初步建立了病毒疫苗微膠囊化的技術(shù)平臺，并通過動物免疫實(shí)驗(yàn)評價了疫苗微膠囊化后的綜合免疫效果。 研究工作主要分為四個部分： 第一部分采用膜乳化-液中干燥法，以可生物降解的合成高分子材料單甲氧基聚乙二醇-聚丙交酯乙交酯(MPEG-PLGA)為載體，將滅活SARS冠狀病毒微膠囊化，制備出基質(zhì)型SARS微球疫苗。

3、膜乳化-液中干燥法的條件比較溫和，微膠囊化過程沒有破壞滅活SARS冠狀病毒的抗原性。小鼠免疫接種實(shí)驗(yàn)證明，SARS微球疫苗滴鼻或皮下接種時，微球均可充分發(fā)揮佐劑作用，誘導(dǎo)出較高水平的粘膜sIgA和血清IgG抗體(p＜0.01，p＜0.05)。 第二部分利用商品化的乙型肝炎病毒蛋白亞單位疫苗，進(jìn)行膜乳化方法制備微膠囊疫苗的技術(shù)參數(shù)和載體材料的研究，并通過動物接種實(shí)驗(yàn)評價微膠囊疫苗的免疫效果。結(jié)果表明，微膠囊的平均粒徑與SPG膜的孔

4、徑成正比，雙親性嵌段共聚物材料對疫苗的包載率較高。小鼠免疫接種實(shí)驗(yàn)同樣證明了乙型肝炎微球疫苗在誘導(dǎo)粘膜和循環(huán)抗體方面的優(yōu)越性(p＜0.05)。 第三部分通過靜電液滴技術(shù)，分別以轉(zhuǎn)染SARS冠狀病毒N蛋白基因和Flt3配體基因編碼序列的基因工程細(xì)胞為囊芯，天然聚電解質(zhì)海藻酸鈉和殼聚糖為囊膜，制備微囊化基因工程細(xì)胞，并進(jìn)行小鼠腹腔移植實(shí)驗(yàn)。研究結(jié)果顯示，海藻酸鈉-殼聚糖-海藻酸鈉微膠囊具有選擇通透性，微囊化基因工程細(xì)胞能夠作為可溶性

5、蛋白產(chǎn)物在體內(nèi)生產(chǎn)和釋放的生物平臺，提高基因免疫的安全性和可控性，并可能作為抗原工程疫苗功能評價的模型系統(tǒng)。將轉(zhuǎn)染SARS冠狀病毒N抗原基因的微囊化細(xì)胞與Flt3配體基因轉(zhuǎn)染的微囊化細(xì)胞聯(lián)合使用可以提高小鼠樹突狀細(xì)胞和細(xì)胞毒性T細(xì)胞的數(shù)量，增強(qiáng)小鼠的細(xì)胞免疫功能。 第四部分根據(jù)超分子自組裝的原理，將以綠色熒光蛋白為篩選標(biāo)志的真核表達(dá)質(zhì)粒pGFP與人工合成的陽離子多聚物在水介質(zhì)中組裝成具有核殼結(jié)構(gòu)的納米粒(亞微膠囊)，進(jìn)行細(xì)胞轉(zhuǎn)染