甲磺酸普立地諾雙氯芬酸鈉注射液的臨床前研究.pdf

1、甲磺酸普立地諾(pridinol mesylate)是一種具有骨骼肌松弛作用的中樞性抗膽堿藥，對肌肉痙攣有明顯的松弛效應，臨床用于肌肉痙攣及伴有疼痛或收縮的運動障礙疾病如腰背疼痛、頸肩腕綜合癥、肩關(guān)節(jié)炎、脊椎變形和帕金森病等。雙氯芬酸鈉(diclofenac sodium)是一種非甾體抗炎藥，具有良好的鎮(zhèn)痛、抗炎和解熱作用，臨床用于各種風濕、類風濕性關(guān)節(jié)炎、骨關(guān)節(jié)炎、強直性脊柱炎、手術(shù)后引起的疼痛及各種原因引起的發(fā)熱等。目前，中國臺灣、

2、日本和阿根廷等已經(jīng)上市的甲磺酸普立地諾制劑，主要有普通片、腸溶片、膠囊和注射用粉針等，但在中國大陸未見甲磺酸普立地諾單方及復方注射液的研究報道，也未見相關(guān)產(chǎn)品上市，僅見本課題組申請的發(fā)明專利。我們將甲磺酸普立地諾和雙氯芬酸鈉組合成復方注射液，在保持甲磺酸普立地諾肌肉松弛作用的基礎(chǔ)上，擬增強該注射液的鎮(zhèn)痛和抗炎效果，更有利于肌肉痙攣及伴有疼痛或運動障礙等病癥的治療，還可用于關(guān)節(jié)痛、神經(jīng)痛、肌肉痛、痛經(jīng)，各種炎癥引起的發(fā)熱等。本文研制的甲磺

3、酸普立地諾雙氯芬酸鈉注射液屬國家3.2類新藥，按照2007年國家食品藥品監(jiān)督管理局第28號令《藥品注冊管理辦法》中“化學藥品注冊分類及申報資料要求”，對其進行了臨床前的部分研究，為甲磺酸普立地諾雙氯芬酸鈉注射液的臨床試驗和新藥注冊積累資料。
　　第一部分，甲磺酸普立地諾雙氯芬酸鈉注射液的處方工藝研究。以注射液的澄明度、穩(wěn)定性和pH值等為考察指標，采用單因素試驗篩選輔料種類，正交試驗篩選輔料最佳用量。結(jié)果，(1)最優(yōu)處方:甲磺酸普立

4、地諾為0.2％，雙氯芬酸鈉為2.5％，甘露醇為0.6％，聚乙二醇400(PEG400)為27％，苯甲醇為4％，焦亞硫酸鈉為0.3％，用適量氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值至7.5，注射用水定容;(2)最佳工藝:量取配制體積40％的注射用水，加入甲磺酸普立地諾，攪拌溶解，依次緩慢加入焦亞硫酸鈉和甘露醇到上述溶液中，攪拌溶解，為溶液A;另于適宜容器中加入PEG400和苯甲醇，混勻，隨即緩慢加入雙氯芬酸鈉，攪拌溶解，為溶液B;將溶液A和溶液B混合，調(diào)節(jié)

5、pH值至7.5;補充注射用水至規(guī)定容量，混勻，過濾、灌封、滅菌、檢漏，即得。
　　第二部分，甲磺酸普立地諾雙氯芬酸鈉注射液的質(zhì)量標準研究。對制備的該注射液進行了鑒別、檢查、含量測定等研究。結(jié)果，鑒別反應靈敏;pH值、熱原、滲透壓等檢查指標均符合注射液相關(guān)要求。該注射液含量測定采取HPLC法，可同時測定甲磺酸普立地諾和雙氯芬酸鈉的含量。色譜條件為:色譜柱為島津Shim-pack VP-ODS C18色譜柱(250 mm×4.6 mm

6、，5μm)，流動相為甲醇∶0.05％磷酸（含0.105％辛烷磺酸鈉）=60∶40;流速為1.0 mL·min-1，檢測波長為215nm，柱溫為30℃，進樣量為10μL。在該色譜條件下，兩主藥峰分離度高，且與雜質(zhì)完全分離;甲磺酸普立地諾在0.5μg·mL-1～200μg·mL-1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，平均回收率為98.09％(n=9)，最低檢測限為0.2ng，最低定量限為1.5ng;雙氯芬酸鈉在5μg·mL-1～500μg·mL-1范圍內(nèi)線

7、性關(guān)系良好，平均回收率為98.05％(n=9)，最低檢測限為2ng，最低定量限為6ng。所建立的含量測定方法簡便、準確，靈敏度高，專屬性強，可用于甲磺酸普立地諾雙氯芬酸鈉注射液中2種主藥的含量測定。
　　第三部分，甲磺酸普立地諾雙氯芬酸鈉注射液的穩(wěn)定性研究。對甲磺酸普立地諾雙氯芬酸鈉注射液進行了高溫試驗和強光照試驗、加速試驗和長期試驗研究。結(jié)果，該注射液在強光照條件下含量有所減少，表明本品應遮光密封保存。甲磺酸普立地諾雙氯芬酸鈉注

8、射液的加速試驗較穩(wěn)定，長期試驗仍在繼續(xù)考察之中。
　　第四部分，甲磺酸普立地諾雙氯芬酸鈉注射液的部分安全性試驗研究。采用寇式改良法測定并計算出甲磺酸普立地諾雙氯芬酸鈉注射液的LD50;常規(guī)法測定其溶血性、肌肉刺激性和血管刺激性。結(jié)果顯示，甲磺酸普立地諾雙氯芬酸鈉注射液的LD50=40.95mg/kg（以甲磺酸普立地諾計）;對家兔無明顯溶血性和肌肉刺激性。
　　第五部分，甲磺酸普立地諾雙氯芬酸鈉注射液的一般藥理學研究。采用甲磺

9、酸普立地諾雙氯芬酸鈉注射液低、中、高三種劑量注射給藥，考察該注射液對實驗動物中樞神經(jīng)系統(tǒng)、心血管系統(tǒng)、呼吸系統(tǒng)的影響。結(jié)果顯示，試驗組的高、中、低劑量與對照組相比，該注射液對小鼠自主活動和協(xié)調(diào)功能均無顯著影響(P＞0.05)，對閾下劑量的戊巴比妥鈉的催眠作用無顯著協(xié)同作用(P＞0.05)，對大鼠的呼吸頻率、血壓、心率也無明顯影響(P＞0.05)。
　　第六部分，甲磺酸普立地諾雙氯芬酸鈉注射液的藥代動力學研究。建立HPLC法，測定給

10、予該注射液后各時間點的血藥濃度，采用DAS2.0版藥代動力學分析軟件處理血藥濃度-時間數(shù)據(jù)，得出該注射液在新西蘭兔體內(nèi)藥代動力學過程符合二室開放模型。其中，甲磺酸普立地諾分布半衰期T1/2α為0.55±0.04h，消除半衰期T1/2β為4.24±0.41h，雙氯芬酸鈉分布半衰期T1/2α為0.65±0.04h，消除半衰期T1/2β為6.25±0.41h，甲磺酸普立地諾的Tmax為1.15±0.04h，Cmax為0.84±0.08μg·m