間皮素基因沉默對(duì)胰腺癌化療藥物作用的影響.pdf

1、胰腺癌是一種常見的消化道惡性腫瘤。據(jù)世界衛(wèi)生組織統(tǒng)計(jì)，世界上每年胰腺癌新發(fā)病例約為21.6萬人，占全部惡性腫瘤的2％，胰腺癌的死亡率非常高，與發(fā)病率接近，在癌癥死因中占第4位。胰腺癌的治療非常棘手。目前首選的治療方式為手術(shù)切除，但由于胰腺癌起病隱秘，早期即發(fā)生轉(zhuǎn)移，80％的病人在初次確診時(shí)已屬晚期，手術(shù)切除的機(jī)會(huì)只有15～20％甚至更低，并且術(shù)后仍有復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移。近年來，胰腺癌的藥物治療已經(jīng)有了顯著的進(jìn)步，化療已成為必不可少的治療手段之一，

2、吉西他濱是胰腺癌化療的首選藥物，吉西他濱聯(lián)合化療與其單獨(dú)用藥相比，能夠提高總生存期，客觀緩解率和無進(jìn)展生存期等，但患者的5年生存率仍較低。
　　 間皮素（mesothelin，MSLN）是一種分化抗原，表達(dá)于正常的間皮組織中，但最新的研究發(fā)現(xiàn)間皮素在多種癌癥中特異性的高表達(dá)，包括間皮瘤，胰腺癌，約70％的卵巢癌和50％的肺癌。Argani P及其同事首次在胰腺導(dǎo)管癌中發(fā)現(xiàn)間皮素的表達(dá)，利用基因表達(dá)系列分析（SAGE）技術(shù)，他們發(fā)

3、現(xiàn)在胰腺癌基因庫中間皮素的標(biāo)記有連續(xù)性的表達(dá)，但是在正常的胰腺組織中卻無表達(dá)，并且在4例早期切除的胰腺癌組織中均檢測(cè)到間皮素mRNA的表達(dá)；同時(shí)利用免疫組化的方法，在全部的60例早期切除的胰腺癌樣本中均檢測(cè)到間皮素。Hassan R及其同事隨后的研究也證實(shí)了這一發(fā)現(xiàn)，他們?cè)?8例胰腺腺癌組織中均檢測(cè)到間皮素的表達(dá)，但是在正常的胰腺組織和慢性胰腺炎中則未檢測(cè)出其表達(dá)。Ordanez NG同樣證實(shí)了在大多數(shù)的胰腺腺癌組織中有間皮素的表達(dá)而在

4、胰島的腫瘤細(xì)胞中無表達(dá)，并且在膽道系統(tǒng)的其他腺癌中，胰腺間皮素也有很高的表達(dá)，例如膽囊癌和膽管癌。
　　 雖然間皮素的生物學(xué)功能仍在進(jìn)一步的探索中，但是目前主要傾向于研究間皮素在腫瘤生物學(xué)中所發(fā)揮的作用。近期的研究結(jié)果提示，間皮素結(jié)合MUC16/CA-125可影響卵巢癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移，并且少量間皮素可釋放入血液，因此在間皮瘤和卵巢癌患者血清中可以檢測(cè)到間皮素水平的升高，此結(jié)果提示，血清間皮素的檢測(cè)可作為卵巢癌診斷及追蹤治療的重要依據(jù)

5、。根據(jù)Li M等的研究發(fā)現(xiàn)，間皮素的表達(dá)促進(jìn)胰腺癌細(xì)胞的增殖與遷移，相應(yīng)的裸鼠模型試驗(yàn)也表明，間皮素的過表達(dá)組的腫瘤體積較對(duì)照組增大4倍。
　　 本試驗(yàn)重點(diǎn)研究間皮素對(duì)胰腺癌化療藥物的影響，通過小RNA干擾技術(shù)沉默間皮素蛋白的表達(dá)后，觀察化療藥物的作用。
　　 材料和方法：
　　 間皮素siRNA和熒光標(biāo)記的siRNA分別通過脂質(zhì)體瞬時(shí)轉(zhuǎn)染入PANC-1細(xì)胞，流式細(xì)胞儀和倒置相差熒光顯微鏡分別檢測(cè)轉(zhuǎn)染效率，Wes

6、tern blot檢測(cè)間皮素基因沉默的效果。以胰腺癌化療藥物吉西他濱、順鉑、阿霉素和葫蘆素E的不同濃度分別處理問皮素基因沉默后的PANC-1細(xì)胞，繼續(xù)培養(yǎng)48h后，MTT法檢測(cè)細(xì)胞增殖情況。試驗(yàn)結(jié)果以SPSS 16.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。
　　 實(shí)驗(yàn)結(jié)果：
　　 1、流式細(xì)胞儀檢測(cè)結(jié)果顯示具有熒光標(biāo)記的PANC-1細(xì)胞占總數(shù)的77.4％，證明大部分細(xì)胞轉(zhuǎn)染成功。
　　 2、熒光倒置相差顯微鏡觀察結(jié)果顯示同一

7、視野下，綠色熒光細(xì)胞數(shù)占可見光下總細(xì)胞數(shù)的80％左右。
　　 3、Western blot檢測(cè)結(jié)果顯示間皮素基因沉默后，間皮素蛋白基本無表達(dá)。
　　 4、MTT法檢測(cè)間皮素基因沉默抑制胰腺癌細(xì)胞增殖結(jié)果顯示，間皮素基因沉默后，細(xì)胞增殖明顯減少（P<0.05）。
　　 5、吉西他濱單獨(dú)使用即具有抑制胰腺癌細(xì)胞增殖的作用，其作用效果隨濃度的增加而逐漸加強(qiáng)，當(dāng)其作用于間皮素基因沉默后的胰腺癌細(xì)胞時(shí)，增殖抑制率在吉西他濱

8、0.1 μM時(shí)即可達(dá)到60.47％±4.234（P<0.01）。
　　 6、順鉑單獨(dú)使用即具有可抑制胰腺癌細(xì)胞增殖的作用，其作用效果隨濃度的增加而逐漸加強(qiáng)，當(dāng)其作用于間皮素基因沉默后的胰腺癌細(xì)胞時(shí)，增殖抑制率在順鉑1μM時(shí)即可達(dá)到59.82％±2.362（P<0.01）。
　　 7、阿霉素單獨(dú)使用即具有抑制胰腺癌細(xì)胞增殖的作用，其作用效果隨濃度的增加而逐漸加強(qiáng)，當(dāng)其作用于間皮素基因沉默后的胰腺癌細(xì)胞時(shí)，增殖抑制率在阿霉素

9、1 μM時(shí)即可達(dá)到80.32％±1.868（P<0.01）。
　　 8、葫蘆素E單獨(dú)使用即具有抑制胰腺癌細(xì)胞增殖的作用，其作用效果隨濃度的增加而逐漸加強(qiáng)，當(dāng)其作用于間皮素基因沉默后的胰腺癌細(xì)胞時(shí)，增殖抑制率在葫蘆素E 1 μM時(shí)即可達(dá)到38.82％±4.299（P<0.01）。
　　 結(jié)論：
　　 1、間皮素基因沉默后，胰腺癌細(xì)胞的增殖受到抑制。
　　 2、間皮素基因沉默后，化療藥物對(duì)胰腺癌細(xì)胞的增殖抑制