樹突狀細胞介導的Th1-Th2失衡在子癇前期發(fā)病機理中的研究.pdf

1、目的：通過檢測外周血及子宮蛻膜中樹突狀細胞(DCs)亞群和對分離的單個核細胞來源的DCs進行誘導培養(yǎng)，探討DCs亞群和表型在正常妊娠和子癇前期患者間的變化，及與Thl/Th2型反應的關系。 方法：分別選取正常妊娠孕婦、子癇前期患者和正常未孕婦女作為研究對象，采用流式細胞技術檢測其外周血樹突狀細胞及其髓樣(MDC)和淋巴樣(PDC)亞群，比較其數(shù)量和比值在妊娠前、妊娠各個時期及子癇前期患者的變化，并與Th1/Th2型細胞因子的含量

2、進行比較。采用免疫組化方法對子宮蛻膜DCs進行定位，分離正常早期妊娠和足月妊娠婦女以及子癇前期患者子宮蛻膜的單個核細胞，采用流式細胞技術檢測其樹突狀細胞及其亞群，比較其數(shù)量和比值在妊娠各個時期及子癇前期患者的變化，并與外周血相比較。同時對分離的外周血和子宮蛻膜的單個核細胞，采用rhGM-CSF+rhlL-4進行誘導培養(yǎng)，觀察DCs在誘導成熟過程中其形態(tài)、表型和功能的變化，并在妊娠前后、妊娠各個時期和子癇前期之間進行比較。 結(jié)果：

3、1.外周血DC數(shù)量和亞群及Thl/Th2型細胞因子的變化：與妊娠前相比，早孕期MDC和PDC數(shù)量有所減少，MDC/PDC比值輕度升高，但無統(tǒng)計學差異；與正常妊娠早期和晚期相比，妊娠中期MDC和PDC數(shù)量明顯減少，MDC/PDC比值顯著升高，但妊娠早、晚期相比無顯著差異；與正常晚期妊娠婦女相比較，子癇前期患者PDC數(shù)量減少，MDC數(shù)量改變不明顯，MDC/PDC比值升高，兩組相比差異顯著。與未孕時期相比，早孕期IL-2顯著降低，IL-4、I

4、L-10顯著升高，IFN-γ輕度降低；妊娠期間IL-2和IL-10隨妊娠進展顯著升高，IL-4在妊娠中期輕度降低，但與其他孕周相比無統(tǒng)計學差異，IFN-γ在妊娠期間變化不明顯；與正常晚期妊娠婦女相比較，子癇前期患者Th1型細胞因子IL-2含量增加，IFN-Y無顯著差異，Th2型細胞因子IL-4減少，但IL-10顯著升高，IL-2/IL-10比值降低、IFN-γ/IL-4比值升高。2-子宮蛻膜中DC數(shù)量和亞群的變化：免疫組織化學染色顯示早

5、期妊娠和晚期妊娠子宮蛻膜中均有CD205陽性DCs存在，數(shù)量稀少，主要分布于子宮蛻膜與滋養(yǎng)細胞層交界處和子宮蛻膜血管周圍，約占整個單個核細胞的1.5﹪左右；子宮蛻膜中以CD11c陽性的MDC為主，CD123陽性的PDC含量很少；流式細胞學檢測顯示，早期妊娠、足月妊娠以及子癇前期患者蛻膜中DCs、MDC均較外周血中含量明顯多，PDC含量差異不顯著；將分離的蛻膜單個核細胞進行誘導培養(yǎng)，可誘導出成熟的具有典型樹枝狀或毛刺樣突起的成熟DCs，并

6、且具有刺激同種異體淋巴細胞增殖和產(chǎn)生T淋巴細胞因子的能力。3.rhGM-CSF+rhlL-4誘導下外周血和子宮蛻膜中DCs表型的變化：對妊娠前、妊娠期和子癇前期患者外周血DCs進行誘導培養(yǎng)，結(jié)果顯示誘導成熟的DCs不表達白細胞混合抗原Lineage，而高表達黏附分子CD80、CD83、CD86和HLA-DR，與妊娠前相比，妊娠期DCs表面C1380、CD83、CD86和HLA-DR表達量明顯減少，而子癇前期患者上述黏附分子表達量明顯升高

7、；DCs成熟后檢測其培養(yǎng)上清液中細胞因子發(fā)現(xiàn)，正常妊娠孕婦產(chǎn)生的IL-10較妊娠前婦女和子癇前期患者增加，而產(chǎn)生的IL-12減少：誘導成熟后DCs均表達CD80和CD86 mRNA，子癇前期患者表達量較正常妊娠顯著增加：進行混合淋巴細胞培養(yǎng)時發(fā)現(xiàn)，正常妊娠孕婦的DCs刺激淋巴細胞增殖的能力較妊娠前減弱，混合培養(yǎng)上清液中產(chǎn)生的IFN-γ明顯減少，IL-4顯著增加，而子癇前期患者的DCs刺激淋巴細胞增殖的能力增強，混合培養(yǎng)上清液中IFN-γ

8、顯著增加，IL-4減少。對正常妊娠早期、足月妊娠和子癇前期患者子宮蛻膜的DCs進行誘導培養(yǎng)發(fā)現(xiàn)，子癇前期患者蛻膜DCs表面CD80、CD83、CD86和HLA-DR表達量較正常早期和足月妊娠顯著增加，刺激同種異體淋巴細胞增殖能力增強，產(chǎn)生的IL-12增加，IL-10減少。 結(jié)論：1．生理妊娠三個時期外周血中Th1/Th2細胞因子含量呈現(xiàn)Th2型為主的趨勢，子癇前期患者呈現(xiàn)Th1型為主的趨勢； 2．DCs在生理妊娠的不同階

9、段其數(shù)量和亞群發(fā)生變化，與生理妊娠中的Th2反應一致，子癇前期患者出現(xiàn)PDC減少和MDC/PDC比值升高現(xiàn)象，并與Th1反應一致。 3-子宮蛻膜中存在DCs，并與外周血一樣，可由單個核細胞誘導而來，且具有抗原提呈能力。 4．妊娠子宮蛻膜與外周血DCs在數(shù)量和亞群的分布上存在差異，正常妊娠蛻膜中也呈現(xiàn)Th2型為主的免疫耐受狀態(tài)，與DC亞群分布一致； 5-子癇前期蛻膜中DCs和MDC含量顯著增加，呈現(xiàn)Thl型為主的免