卵巢早衰不孕癥的臨床及相關(guān)遺傳學(xué)基礎(chǔ)研究.pdf

1、第一章卵巢早衰的不孕癥患者臨床特征的初步探討 目的：探討卵巢早衰的不孕癥患者的臨床特征、病因分型及特征，初步分析POF不孕癥患者的內(nèi)分泌特點(diǎn)，并探討對(duì)其診斷治療方法的情況。 方法：從病因分型、診斷、治療方面回顧性總結(jié)、分析符合卵巢早衰診斷標(biāo)準(zhǔn)的不孕癥婦女138例，并對(duì)其中45例患者的血清抑制素B和其他內(nèi)分泌水平進(jìn)行病例對(duì)照研究，初步分析INHB與其他生殖內(nèi)分泌的相關(guān)性，并找尋其之間的函數(shù)規(guī)律。 結(jié)果：(1)在本組

2、病例中有明顯發(fā)病原因的有23例(16.67﹪)，其中行其中行卵巢手術(shù)的3例，服用卵巢毒性藥物或有毒物接觸史的3例，曾感染過腮腺炎者4例，有全身或局部免疫性疾病患者2例，染色體核型異常的11例。本組患者除雌激素低落癥狀外，未發(fā)現(xiàn)明顯的心腦血管疾病及其他重大的疾病。(2)原發(fā)閉經(jīng)7例，繼發(fā)閉經(jīng)131例，原發(fā)不孕110例(79.71﹪)，繼發(fā)不孕28例(20.29﹪)。父母為近親結(jié)婚的4例，家族出現(xiàn)不孕及早絕經(jīng)或POF的共9例。所有患者均有情

3、緒不穩(wěn)定，疲乏，記憶力下降等癥狀，并有不同程度的生殖泌尿道萎縮、干燥等癥狀，并與病程長(zhǎng)短和治療與否和治療時(shí)間長(zhǎng)短有關(guān)。(3)POF不孕組均較對(duì)照組INHB吸光度、外推濃度、E<'2>、PRL、To值低；較對(duì)照組FSH、LH高，差異具有顯著性(p<0.05)。(4)無論患者組還是對(duì)照組FSH與LH與INHB無相關(guān)性，患者組E<,2>與INHB亦無相關(guān)性p>0.05。對(duì)照組E<,2>與INHB外推濃度統(tǒng)計(jì)處理后顯示呈正相關(guān)(p<0.05)。

4、兩組合并后，INHB分別與FSH與呈負(fù)相關(guān)(r=-0.748，p<0.01)，與LH呈負(fù)相關(guān)(r=-0.693，p<0.01)，與E<,2>呈正相關(guān)(r=0.617，p<0.01)，相關(guān)性均有極顯著意義。(5)FSH與INHB濃度相關(guān)性的觀測(cè)值符合線性函數(shù)曲線，兩者呈線性負(fù)相關(guān)。E<,2.與INHB濃度符合線性函數(shù)曲線，兩者呈正相關(guān)。LH與INHB濃度相關(guān)性的觀測(cè)值更附合反函數(shù)曲線。 (6)在給予人工周期后，所有患者雌激素低下的癥狀都得

5、到了較好的改善，F(xiàn)SH較前有所下降，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理差異有顯著性(p<0.05)，LH和E2較前也略有下降，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理差異無顯著性(p>0.05)。(7)在人工周期治療中，已有2例患者未經(jīng)促排已獲妊娠。1例在人工周期FSH明顯下降(但仍有40 IU/L以上)后采用HMG/HCG后單胎妊娠。本組總?cè)焉锫蕿?.17﹪(3/138)。 結(jié)論：(1)POF不孕癥患者基本發(fā)育及狀況良好，適宜助孕和妊娠。(2)遺傳因素是POF不孕癥重要的發(fā)病

6、原因，有必要對(duì)其進(jìn)行遺傳篩查。(3)POF不孕癥內(nèi)分泌失調(diào)包括雄激素缺乏，INHB可作為反應(yīng)POF內(nèi)分泌失調(diào)的輔助檢查。(4)雌激素替代可改善POF不孕癥失調(diào)的內(nèi)分泌環(huán)境。(5)POF不孕癥患者自然妊娠率較低，需借助其他輔助生育手段。 第二章核型分析在POF不孕患者中的探討 目的：探討POF不孕癥患者中染色體異常的發(fā)生率及具體核型分布，初步探討染色體異常的位點(diǎn)與POF發(fā)病的關(guān)系。 方法：用G-分帶技術(shù)對(duì)65例PO

7、F不孕癥患者進(jìn)行檢測(cè)，檢測(cè)結(jié)果光鏡觀察后掃描記錄核型分析圖像。 結(jié)果：(1)65例POF不孕癥患者中染色體正常者(46，XX)54例，占83.08﹪：染色體核型異常者共11例，占16.92﹪。其中單純X染色體異常的有9例，單純常染色體異常者1例，X染色體與常染色體平衡易位者1例。(2)核型異常的分別是45，XO的3例；嵌合型2例45，XO/46，XX； X單體與三體嵌合型1例45，XO/47，XXX；X短臂等臂嵌合型45，X/4

8、6，X，i(Xp)1例； X環(huán)狀染色體嵌合型45，X/46，X，r(x)，(p22-q25)1例； X染色體長(zhǎng)臂微缺失46，XX，del(X)q(25) 1例； X與 14號(hào)染色體易位46，XX，t(X：14)(q22，q23)1例； 13號(hào)與14號(hào)染色體易位45，XX，-13，-14，t(13，14)1例。(3)4例患者發(fā)生X染色體的斷裂、重排或缺失。斷裂點(diǎn)主要集中在Xq22-Xq25。 結(jié)論：(1)POF不孕癥中染色體異常比

9、例較高，對(duì)所有卵巢早衰患者行染色體檢查很有必要。(2)X染色體異常在POF染色體異常占較大的比例，引起卵巢功能失調(diào)的部位主要集中在x染色體長(zhǎng)臂上。(3)有必要結(jié)合現(xiàn)代分子生物學(xué)技術(shù)對(duì)POF不孕癥染色體細(xì)微異常檢測(cè)。 第三章 BMP15基因外顯子突變與多態(tài)研究與POF不孕癥的關(guān)聯(lián)性研究 目的：分析BMP15基因外顯子突變及多態(tài)與中國(guó)POF不孕癥患者發(fā)病的關(guān)聯(lián)性。 方法：對(duì)92例POF不孕癥患者和76例同年齡對(duì)照組的

10、BMP15基因蛋白編碼區(qū)用直接測(cè)序的方法進(jìn)行分析。同時(shí)將兩組的臨床特征進(jìn)行分析比較。 結(jié)果：(1)在POF不孕組與對(duì)照組中均未發(fā)現(xiàn)BMP15基因兩個(gè)外顯子的突變。(2)POF不孕組與對(duì)照組在位于第1外顯子5’-UTR的SNP rs(3810682 C→G：ss16336587)的基因頻率上比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p>0.05)。(3)位于BMP15基因第2外顯子蛋白編碼區(qū)SNPrs17003221(C→T)的基因頻率上比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異

11、(p>0.05)。(4)該組所研究的中國(guó)漢族人群中在POF不孕組(C/G：97.8﹪/2.2﹪)及對(duì)照組(C/G：98.0﹪/2.0﹪)中等位基因C的頻率遠(yuǎn)大于等位基因G的頻率，與文獻(xiàn)報(bào)道相反。(5)內(nèi)分泌FSH、LH、To、E<,2> POF不孕組與對(duì)照組比較結(jié)果同第一章，POF不孕組與對(duì)照組的PRL比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p>0.05)。 結(jié)論：(1)在中國(guó)漢族人群中BMPl5基因外顯子的突變非常少見，與POF不孕癥發(fā)病不相關(guān)。(

12、2)SNP rs(3810682 C→G：ss16336587)與SNP rs17003221(C→T)多態(tài)與POF不孕癥發(fā)病不相關(guān)。(3)SNP基因頻率在不同人種間有較大變異。(4)POF不孕癥中PRL值的變化尚不確定。 第四章FMRl基因5’-UTR(CGG)n重復(fù)次數(shù)與卵巢早衰不孕癥的相關(guān)性研究 目的：FMRl基因5’-UTR(CGG)n重復(fù)次數(shù)分析與中國(guó)POF不孕癥患者發(fā)病的關(guān)聯(lián)性。 方法：對(duì)92例POF

13、不孕癥患者和76例同年齡對(duì)照組的FMRl基因5’-UTR(CGG)n重復(fù)次數(shù)采用聚丙烯酰胺凝膠電泳進(jìn)行粗略篩查，并用熒光PCR/毛細(xì)管電泳進(jìn)行驗(yàn)證。結(jié)果 (1)PAGE膠顯示POF不孕組與對(duì)照組在(CGG)n重復(fù)次數(shù)<18次、18～35次、36～52次、>52次四個(gè)組段的構(gòu)成比無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(x<'2>=5.3526，p>0.05)；POF不孕癥組在重復(fù)次數(shù)多于36次的患者比例多于對(duì)照組，差異具有顯著性(p<0.05)。(2)POF不孕組

14、與對(duì)照組FMRl基因CGG等位基因頻率構(gòu)成有差異，最大等位基因頻率為n=26。(3)中國(guó)漢族POF不孕癥中FMRl基因CGG重復(fù)序列的前突變與其發(fā)病無相關(guān)性，但POF不孕組較對(duì)照組CGG重復(fù)次數(shù)多，差異具有顯著性(p<0.05)。(4)POF不孕組FMRl基因CGG重復(fù)次數(shù)與患者未用藥出現(xiàn)閉經(jīng)年齡和血清FSH無相關(guān)性(p>0.05)。 結(jié)論：(1)熒光PCR技術(shù)對(duì)POF患者進(jìn)行FMRl基因5’-UTR．(CGG)n重復(fù)次數(shù)的篩查

15、經(jīng)濟(jì)、簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確。(2)FMRl前突變與POF不孕癥發(fā)病無相關(guān)，但POF不孕組CGG重復(fù)次數(shù)較對(duì)照組多，但均在正常范圍內(nèi)，發(fā)病機(jī)理和CGG重復(fù)次數(shù)突變?cè)诓煌巳褐行柚匦禄帧?3)對(duì)POF不孕癥患者進(jìn)行FMRl基因篩查是有必要的，以及必要的具體的基因分析和家系調(diào)查。 本研究通過POF不孕癥臨床及相關(guān)基礎(chǔ)研究，初步探討了POF不孕癥的臨床特點(diǎn)及相關(guān)候選基因的關(guān)聯(lián)情況，對(duì)POF不孕癥臨床特征、核型特點(diǎn)、BMP15基因與組的FMR1基