輪狀病毒致乳鼠腸道外感染后細(xì)胞因子和組織病理變化的研究.pdf

1、目的：1、建立輪狀病毒(Rotavirus，RV)腸道內(nèi)、外感染的乳鼠模型，檢測(cè)外周血Th1細(xì)胞因子(IFN-γ）和Th2細(xì)胞因子（IL-10）的水平，比較Th1/Th2細(xì)胞因子在RV腸道內(nèi)外感染中變化的差異性，探討Th1/Th2細(xì)胞因子免疫自穩(wěn)失衡是否參與RV腸道外感染的發(fā)病，為臨床防治重癥RV感染提供新的思路。2、觀察乳鼠感染RV后的臨床表現(xiàn)及不同時(shí)間點(diǎn)組織病理改變，探討腸道外不同組織病理?yè)p傷特點(diǎn)。
　　方法：以恒河猴胚腎細(xì)胞

2、（MA-104）培養(yǎng)猴 RV SA-11，擴(kuò)增，組織細(xì)胞半數(shù)感染量（TCID50）法滴定病毒滴度，分裝，-80℃保存?zhèn)溆?。?shí)驗(yàn)動(dòng)物選用10~11日齡的清潔級(jí)ICR乳鼠，將48只乳鼠隨機(jī)分為3組，每組16只，即腸道外組：乳鼠經(jīng)腹腔注射150μl SA11株RV培養(yǎng)液；腸道內(nèi)組：乳鼠灌胃150μl SA11株RV培養(yǎng)液；正常對(duì)照組：不做任何特殊處理。接種病毒后，各組乳鼠隔離飼養(yǎng)。接種當(dāng)天以第0天計(jì)，接種后每天觀察乳鼠的活動(dòng)狀況、飲食情況、體

3、型、毛色光澤、體型、大便變化等，并收集大便經(jīng)膠體金法檢測(cè)其中RV抗原。分別在接種后的第3天、第8天處死乳鼠，收集外周血，離心留取血清，經(jīng)ELISA檢測(cè)細(xì)胞因子IFN-γ和IL-10水平，留取肝、肺、心、脾、腎、腦、小腸組織，蘇木精－伊紅（HE）染色光鏡下觀察形態(tài)學(xué)改變。
　　結(jié)果：1、RV SA-11株在MA-104細(xì)胞內(nèi)增殖良好，感染后12h即可出現(xiàn)病變，表現(xiàn)為拉網(wǎng)、細(xì)胞圓縮、脫落，24h病變可達(dá)到(+++～++++)，組織細(xì)胞

4、半數(shù)感染量法滴定所收集的病毒液，滴度TCID50為10-4。2、腸道外組乳鼠腹瀉不明顯，但是腸外感染癥狀重，表現(xiàn)為食欲不振，活動(dòng)減少，體毛蓬松、無(wú)光澤，嗜睡、對(duì)刺激反應(yīng)差、大便量少等，第3~4天達(dá)到頂峰，至第8天精神狀況好轉(zhuǎn)，但食欲欠佳，皮毛無(wú)光澤。腸道內(nèi)組所有乳鼠均出現(xiàn)腹瀉，第2~3天達(dá)到頂峰，至第8天癥狀完全消失。3、腸道內(nèi)組IFN-γ水平在接種RV后第3天明顯升高，與正常對(duì)照組比較P<0.01，隨后明顯下降，至第8天達(dá)到基線水平；

5、IL-10水平在第3天、第8天無(wú)明顯改變。腸道外組IFN-γ水平在第3天亦升高，與正常對(duì)照組比較P<0.05，與腸道內(nèi)組比較無(wú)差異，第8天下降至正常范圍；IL-10水平在第3天明顯升高，與正常對(duì)照組和腸道內(nèi)組比較P<0.05，第8天水平下降，但是仍然高于正常值。4、RV腸道外感染病程長(zhǎng)，多臟器受累，病理改變較重。感染后第3天腸道外組乳鼠的肝臟、腎臟、肺臟、小腸表現(xiàn)不同程度的細(xì)胞水腫、充血、壞死脫落等，脾臟白髓擴(kuò)大，生發(fā)中心增多，第8天部

6、分臟器淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)明顯，呈現(xiàn)加重或趨向慢性感染的特點(diǎn)，心肌早期輕度濁腫，大腦未見(jiàn)明顯改變。
　　結(jié)論：1、ICR乳鼠腸道內(nèi)、外感染RV模型建立成功。乳鼠腸道內(nèi)感染RV尤其是早期以IFN-γ表達(dá)為主，Th1反應(yīng)為主；腸道外感染早期呈現(xiàn)Th1-Th2混合反應(yīng)，而后期以Th2應(yīng)答占優(yōu)勢(shì)，Th1/Th2類細(xì)胞因子平衡機(jī)制失衡，該機(jī)制可能是RV腸道外播散的重要原因。2、RV可以引起腸道外肝、肺、腎、脾等多器官病變，部分組織器官損傷逐漸加重或