粘性放線菌單菌種早期生物膜的連續(xù)觀察及胞外多糖合成的研究.pdf

1、對粘性放線菌單菌種生物膜的形成過程進行連續(xù)動態(tài)觀察，并比較生物膜形成過程中細(xì)菌合成胞外多糖的能力，以此了解粘性放線菌生物膜形成過程中的結(jié)構(gòu)演化特點，并探討胞外多糖在粘性放線菌生物膜形成各個階段的可能作用。 方法：粘性放線菌在靜止培養(yǎng)基的玻片上形成生物膜，用BOBO<,TM>-3和Calcoflour<'TM>分別對細(xì)菌和胞外多糖進行染色，在CLSM下觀察生物膜結(jié)構(gòu)變化及細(xì)菌與多糖的空間分布。同樣條件下形成生物膜，用蒽酮-硫酸法測

2、定細(xì)菌合成胞外水溶性多糖與水不溶性多糖的含量。 結(jié)果：1．粘性放線菌生物膜的形成可分三個階段：初始粘附期(12小時以前)，生物膜發(fā)展期(12-24小時)，生物膜成熟期(24小時以后)。2．細(xì)菌在玻片上首先形成細(xì)絲狀(filamentous)的粘性物質(zhì)，疏松易洗脫，之后在12小時左右形成相對牢固的不易洗脫的堆積粘附物，此時也發(fā)現(xiàn)水不溶性胞外多糖的含量出現(xiàn)一個劇增峰值(P<0.05)。3．在生物膜的發(fā)展期，細(xì)菌生長與多糖堆積迅速，空

3、間分布一致，且可看到此階段早期整個生物膜呈細(xì)菌與多糖的大量團塊堆積，無明顯的生物膜結(jié)構(gòu)，而晚期細(xì)菌與多糖出現(xiàn)了典型的成熟生物膜結(jié)構(gòu)，細(xì)菌緊密包裹在胞外多糖基質(zhì)中，其間充滿孔隙，表面布滿溝壑。4．成熟期，生物膜抗流體沖擊能力明顯增強，CLSM下有典型的成熟生物膜結(jié)構(gòu)，在生物膜內(nèi)部還有未被基質(zhì)包裹的散在細(xì)菌。 結(jié)論：1．粘性放線菌能夠在無獲得性膜的無機物體表面形成穩(wěn)定的單菌種生物膜，而水不溶性胞外多糖是生物膜粘附發(fā)展的重要前提和基礎(chǔ)