Survivin在腦膠質(zhì)瘤中表達(dá)意義的研究.pdf

1、目的：腦膠質(zhì)細(xì)胞瘤約占成人原發(fā)性顱內(nèi)腫瘤的50-60％，是最常見的顱內(nèi)惡性腫瘤。膠質(zhì)瘤的治療，目前以手術(shù)治療為主，由于腫瘤呈浸潤性生長，與腦組織無明確分界，難以徹底切除，術(shù)后復(fù)發(fā)也幾乎是不可避免的。因此，深入研究膠質(zhì)瘤的生物學(xué)行為以及其生長調(diào)控因子，對于術(shù)后患者輔助治療的選擇以及預(yù)后的精確估計(jì)都有很深刻也很實(shí)際的意義。本試驗(yàn)從上述問題著手，了解凋亡抑制蛋白(IAP)Survivin在腦膠質(zhì)瘤中表達(dá)情況，以此探討Survivin的表達(dá)與腫

2、瘤異質(zhì)性之間的聯(lián)系，從而進(jìn)一步提高腦質(zhì)瘤的總體治療水平。 實(shí)驗(yàn)方法 方法：(1)研究對象：選擇選取中國醫(yī)科大學(xué)第一臨床學(xué)院神經(jīng)外科2003年1月至2004年12月間手術(shù)切除的人腦膠質(zhì)瘤組織標(biāo)本54例，根據(jù)WHO(1999年)關(guān)于人腦膠質(zhì)瘤病理分類方法，采用S-P超敏(鼠、兔)試劑盒免疫組化方法染色，選取正常腦組織6例作為染色對照組。(2)石蠟切片及HE染色：手術(shù)切除標(biāo)本常規(guī)，10％福爾馬林溶液固定，石蠟包埋，制成4μm厚

3、切片。(3)免疫組化染色：石蠟切片常規(guī)二甲苯脫蠟，每張切片加1滴過氧化物酶阻斷劑阻斷內(nèi)源性過氧化物酶的活性，室溫下孵育20分鐘。切片放入0.01mmol/L的枸櫞酸溶液中，微沸，室溫下自然冷卻。每張切片1滴非免疫動物血清，室溫下孵育20分鐘，甩去。加適當(dāng)稀釋的Survivin第一抗體，4℃過夜。第二天每張切片加1滴生物素標(biāo)記的第二抗體，室溫下孵育10分鐘。加1滴鏈親和素．過氧化酶溶液，室溫下孵育10分鐘。每張切片加2滴新鮮配置的CAB溶

4、液，顯微鏡下觀察5-10分鐘，蘇木素復(fù)染，中性樹脂封固切片。Survivin染色的半定量判斷標(biāo)準(zhǔn)，采用人工觀察的方法。采用自動圖像分析系統(tǒng)測定視野的光密度值。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS10.0 forwindows軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果 染色的結(jié)果顯示所有的膠質(zhì)瘤均顯示了不同程度的Survivin的表達(dá)，但在正常腦組織中Survivin的表達(dá)均為陰性。Survivin的表達(dá)程度在不同級別膠質(zhì)瘤中顯示了明顯差別，Surv

5、ivin的表達(dá)程度隨腫瘤級別升高而升高，統(tǒng)計(jì)學(xué)顯示其分布差異顯著(p<0.01)。同時，不同級別膠質(zhì)瘤Survivin蛋白表達(dá)的光密度值有明顯差別，組織級別越高，Survivin蛋白平均光密度值越大，隨組織學(xué)級別升高Survivin蛋白平均光密度值有明顯增加。惡性膠質(zhì)瘤往往具有異質(zhì)性，比較了腫瘤實(shí)質(zhì)和其周邊Survivin染色蛋白染色的光密度值，二者差異顯著(P<0.001)。 結(jié)論 1、Survivin在正常腦組織中均