四川食用菌病毒dsRNA的檢測和對多菌靈的敏感性測定.pdf

1、食用菌病毒是真菌病毒的一部分，絕大部分食用菌病毒的基因組是由dsRNA組成，而且多數(shù)是多節(jié)段的。食用菌病毒具有很強(qiáng)的潛隱性，除雙孢蘑菇病毒病是典型的爆發(fā)性病害外，其它食用菌病毒通常并不引起寄主明顯病征，這為食用菌病毒病害的早期診斷帶來麻煩，對生產(chǎn)造成病害隱患。dsRNA技術(shù)是在研究真菌病毒的過程中發(fā)展起來的檢測RNA病毒的技術(shù)，具有準(zhǔn)確、方便和快捷的優(yōu)點，是目前檢測食用菌病毒最為常用的方法。 多菌靈(Carbendazim)為苯

2、并咪唑類廣譜內(nèi)吸性殺菌劑，對許多真菌(包括子囊菌、半知菌和擔(dān)子菌)有抑制和殺滅作用，食用菌生產(chǎn)上常用來抑制雜菌生長，提高菌袋成功率。但是，多菌靈化學(xué)性質(zhì)相當(dāng)穩(wěn)定，殘效期較長，其對食品安全性的影響引起了越來越多人的關(guān)注。為了了解四川省食用菌中dsRNA病毒的攜帶情況，為病毒病害的防治與食用菌脫毒育種提供一定依據(jù)，同時了解四川省主要栽培的食用菌菌株對多菌靈的敏感性及多菌靈在子實體中的殘留，為多菌靈的正確和科學(xué)使用提供參考，我們于2006～2

3、008年從四川省內(nèi)主要的食用菌科研單位和食用菌產(chǎn)區(qū)，通過征集試管母種和采集子實體組織分離的方法獲得包括雙孢蘑菇、香菇、平菇、茶樹菇、雞腿菇和金針菇等主要大面積栽培的食用菌菌株87個，對它們進(jìn)行了dsRNA檢測及陽性菌株的高溫、低溫和藥物處理，多菌靈敏感性測定，同時選取茶樹菇進(jìn)行了多菌靈在子實體中的殘留測定，從而明確了四川食用菌病毒dsRNA的攜帶情況和對多菌靈的敏感性及多菌靈在子實體中的殘留，其結(jié)果如下： 1.對所采集的87個食

4、用菌菌株進(jìn)行dsRNA的提取，經(jīng)1％瓊脂糖凝膠電泳分析表明：所檢測的87個食用菌菌株中，有26個菌株含有dsRNA，占29.9％。其中：平菇類中有16個，占平菇類的38.1％；香菇類有9個，占香菇類的81.8％；其它珍稀菌類1個，占11.1％；不同地理來源和品種的雙胞蘑菇、金針菇、雞腿菇和木耳菌株均未檢測到dsRNA。 2.平菇、鳳尾菇、秀珍菇、香菇和茶樹菇dsRNA陽性菌株經(jīng)過高溫、低溫和藥物脫毒處理后，采用dsRNA分析技術(shù)

5、進(jìn)行檢測，所有菌株電泳圖譜dsRNA條帶均依然存在，表明脫毒難度大。經(jīng)過高溫、低溫和藥物處理前后在PDA平板上的生長速度的差異顯著性因處理方法和菌株不同而不同。其中平菇菌株經(jīng)高溫處理前后平均生長速度有明顯差異：鳳尾菇菌株經(jīng)cycloheximide處理前后生長速度有明顯差異。其它菌株各處理前后無明顯變化。 3.對平菇、香菇、雙孢蘑菇、茶樹菇、金針菇、雞腿菇、木耳及其它珍稀菌類共60個食用菌菌株進(jìn)行的多菌靈敏感性測定表明不同品種和

6、類別及相同品種不同菌株對多菌靈具有不同的敏感性，其EC50差異很大。在無藥平板上，各菌類菌絲能夠正常生長形成菌落，菌絲潔白健壯。在含藥平板上，平菇、雙孢蘑菇、茶樹菇、雞腿菇和木耳菌絲生長均受到抑制，隨著藥劑濃度的增加，菌落直徑也逐漸減小。平菇和茶樹菇菌株對多菌靈有一定耐受力，EC50分布12.9～37μg/ml之間；雙胞蘑菇和雞腿菇對多菌靈的耐受力次于平菇，EC50分布3.4～4.07μg/ml之間；木耳菌株對多菌靈最敏感，EC50分布