外源性血管內(nèi)皮生長因子結(jié)合高壓氧治療對大鼠隨意皮瓣存活的實驗研究.pdf

1、目的： 修復(fù)醫(yī)學(xué)是近年來研究的熱點，隨著社會的進步和醫(yī)學(xué)的發(fā)展，其重要性越來越受到人們的關(guān)注，一般來講，修復(fù)過程是臨床各種創(chuàng)傷和疾病治療過程中的共同轉(zhuǎn)歸。理想的修復(fù)結(jié)局應(yīng)當是受創(chuàng)傷組織解剖結(jié)構(gòu)和生理功能達到完全的康復(fù)。但在實際的修復(fù)過程中，許多組織內(nèi)外因素將從細胞、分子以及基因水平影響或干擾修復(fù)過程，從而使修復(fù)過程難以按照人的意愿發(fā)展而出現(xiàn)修復(fù)失控。在整形修復(fù)外科領(lǐng)域里，隨意型皮瓣是最常運用的修復(fù)方式之一。但由于皮瓣中沒有知名的

2、血管，血供僅靠皮下的毛細血管網(wǎng)，故在皮瓣設(shè)計上，常須遵循一個原則，即皮瓣的長、寬度之比的限度為長：寬=1．5：1，在某些局部血運豐富的區(qū)域，可達3：1。超出這個范圍，皮瓣的遠端極易發(fā)生缺血壞死。隨意皮瓣移植有著10%-20%的失敗率，當必須采用這種超長皮瓣時，往往須做一次“延遲”手術(shù)，以改建皮瓣中的血供系統(tǒng)，保證血運。如何能實現(xiàn)這種超長皮瓣的一次轉(zhuǎn)移成功，是一個值得研究的課題。本實驗研究旨在探討超長隨意皮瓣局部注射血管內(nèi)皮生長因子（VE

3、GF）合并應(yīng)用高壓氧（Hyperbaric Oxygen，HBO）是否可改善皮瓣微循環(huán)、增加皮瓣的血運從而提高皮瓣成活率。 材料與方法： 1、分組：成年大鼠12只按照隨機分配的原則，分為2組，A組（實驗組）：6只；B組（空白對照組）：6只。 2、皮瓣制備：于大鼠腹部制備隨意皮瓣，將其長寬比例定為3：1（3X1cm）。用5%的戊巴比妥鈉（10mg/kg）靜脈注射麻醉后，脫毛、備皮、消毒后，從預(yù)制皮瓣的遠端開始，于肉

4、膜層與真皮下血管網(wǎng)層之間分離皮瓣，制備成隨意型皮瓣。 3、VEGF試劑注射。 4、高壓氧處理。 5、術(shù)后于第4天、第10天、第12天分別對成形皮瓣的遠、中、近段做PU值測定。術(shù)后第12天處死大鼠，切取皮瓣標本，并立即用4%PFA（多聚甲醛）溶液固定，制作蠟塊，連續(xù)切片，做常規(guī)染色觀察組織形態(tài)變化，免疫組化法（SP法）分析增殖細胞核抗原（PCNA）和微血管密度（MVD）的檢測。用SPSS13．0建立數(shù)據(jù)庫并對結(jié)果進

5、行方差分析。 結(jié)果： ①激光多普勒皮膚血流量（PU值）測定皮瓣形成前兩組值差異無統(tǒng)計學(xué)意義。在皮瓣形成后的不同時期兩組皮瓣均表現(xiàn)為遠段血流灌注比中段和近段差，其中近段血供最佳，兩組皮瓣形成后同一時期不同部位的值在近段的差異性無統(tǒng)計學(xué)意義，而中、遠段值有顯著差異。 ②HE染色：A組存活皮瓣的皮下組織有一定程度的水腫，表皮增生活躍，表皮下有大面積的肉芽組織增生，細胞增生明顯，大量新生毛細血管形成。B組存活皮瓣皮下組織

6、水腫明顯，有散在的皮下出血，新生血管和肉芽組織分布范圍明顯小于A組。遠端皮瓣完全壞死，細胞形態(tài)喪失。 ③增殖細胞核抗原（PCNA）檢測：A組存活皮瓣中細胞增生活躍（PI=63%），大量棕黃染色的增殖細胞核，基底層細胞增生尤為明顯，增生的肉芽組織中有大量的新生毛細血管，B組表達較弱（PI=20%），陽性細胞散在分布，新生血管少。兩組皮瓣有顯著差異性。 ④皮瓣微血管密度（MVD）檢測：A組有大量的被棕黃染色的血管內(nèi)皮細胞，端

7、面血管分布密集MVD=45個/c㎡，B組血管分布較少，棕黃染色的血管內(nèi)皮細胞稀疏MVD=20個/c㎡。兩組MVD有顯著差異性（P<0．001）。 結(jié)論： 1、術(shù)后局部注射血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）合并應(yīng)用高壓氧（Hyperbaric Oxygen，HBO）治療可明顯降低大鼠腹部隨意皮瓣壞死率，促進皮瓣成活。2、HBO能提高皮瓣組織中的血管密度。3、局部注射血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）合并應(yīng)用高壓氧促進隨意皮瓣微小血管形