應用IVCT分析不同的環(huán)境對轉(zhuǎn)移性肺腺癌細胞的影響.pdf

1、目的:
　　肺腺癌腫瘤細胞在原位增殖并向周圍侵襲轉(zhuǎn)移，在轉(zhuǎn)移的過程中，微環(huán)境隨著區(qū)域的不同而改變，為了適應多變的環(huán)境，腫瘤細胞的一些特征也隨之改變。因此，轉(zhuǎn)移肺腺癌腫瘤細胞除具有原位腫瘤細胞的特征外，還具有一些為適應環(huán)境變化而獲得新的特征。但是，以往對這些細胞形態(tài)特點變化的分析多是基于傳統(tǒng)的組織固定方法，而這些方法常?？梢砸鹨恍┎豢杀苊獾膯栴}，如人為操作或是化學試劑可以造成局部的血管收縮，血供丟失進而使組織缺氧。這些問題又往往影

2、響對結(jié)果的判斷以及分析，從而對結(jié)果的正確性產(chǎn)生影響。活體內(nèi)凍結(jié)技術(in vivo cryotechnique)，通過直接將液體冷凍劑傾倒在活體的動物器官上從而有效的避免由于人為操作，化學試劑等所帶來的一些影響。
　　為了避免傳統(tǒng)的固定方法所帶來的問題以及更好地分析結(jié)果，采用IVCT固定組織進而分析肺腺癌中轉(zhuǎn)移細胞在不同環(huán)境下的行為特征。
　　方法:
　　Lewis肺癌細胞的培養(yǎng);應用培養(yǎng)好的Lewis細胞制作動物模型

3、;采用IVCT處理動物模型中的肺組織并將肺組織塊進行石蠟包埋;將石蠟包埋的肺組織塊切片染色，觀察，記錄實驗結(jié)果。
　　結(jié)果:
　　1.應用浸泡固定然后脫水（immersion-fixation followed by dehydration）的方法制作的組織細胞標本呈現(xiàn)出血管受損，細胞皺縮，細胞間隙增大，細胞質(zhì)密度增加，核深染等問題;應用IVCT制作的組織細胞標本中，細胞形態(tài)以及內(nèi)部結(jié)構(gòu)如細胞質(zhì)，細胞核等清晰完整。
　

4、　2.在血管周圍的原位肺腺癌腫瘤細胞和轉(zhuǎn)移的腫瘤細胞都表達HIF-1α（缺氧誘導因子-1α），但在壞死區(qū)域HIF-1α陰性，且離血管越遠HIF-1α信號越強。
　　3.在縱隔淋巴結(jié)中，皮質(zhì)淋巴竇和邊緣竇中可見大量流動的腫瘤細胞，且HIF-1α呈現(xiàn)陰性。但是在淋巴濾泡中可見少量腫瘤細胞，并未有腫瘤的形成，且在該區(qū)域腫瘤細胞HIF-1α也呈現(xiàn)陰性。
　　4.在原位腫瘤中，腫瘤組織對周圍正常肺組織產(chǎn)生嚴重的擠壓，正常組織結(jié)構(gòu)破壞嚴

5、重。在轉(zhuǎn)移腫瘤中，腫瘤組織亦對周圍正常脂肪細胞產(chǎn)生擠壓，但是脂肪細胞形態(tài)結(jié)構(gòu)清晰可見，并未遭到嚴重的破壞，且相比原位腫瘤，其擠壓程度也較輕。
　　5.在轉(zhuǎn)移腫瘤中，漿細胞多在血管周圍聚集，其中IgM陽性細胞數(shù)量最多，IgG-Fc陽性細胞其次，IgA陽性細胞最少。
　　結(jié)論:
　　1.通過和傳統(tǒng)的固定方法比較，IVCT可以使組織細胞呈現(xiàn)出更完整清晰的細胞形態(tài)和結(jié)構(gòu)，還可以防止細胞收縮過度而影響對結(jié)果的分析，是一種較為實用

6、的組織固定方法。
　　2.轉(zhuǎn)移的腫瘤細胞和原位的腫瘤細胞一樣，在血管周圍多呈現(xiàn)出缺氧狀態(tài)，由于腫瘤細胞生長速度過快，離血管較遠的腫瘤細胞得不到充足氧分供給，往往形成經(jīng)典的“血管-缺氧區(qū)域-壞死區(qū)域”結(jié)構(gòu)區(qū)域。缺氧與腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關。
　　3.由于環(huán)境的改變或是腫瘤細胞自身成長以及轉(zhuǎn)移的需要，在縱隔淋巴結(jié)中的腫瘤細胞不需要通過自身表達HIF-1α來適應環(huán)境或是滿足自身的需求?？v隔淋巴結(jié)對于肺腺癌來說，是一個重要的轉(zhuǎn)移途徑