NBD(NEMO-bonding domain)多肽對(duì)破骨細(xì)胞生成影響的體外研究.pdf

1、目的:探討NBD多肽對(duì)破骨前體細(xì)胞分化為破骨細(xì)胞及其骨吸收功能的影響，從而為骨質(zhì)溶解吸收性疾病的治療提供新的研究藥物。
　　材料和方法:選取小鼠來(lái)源的細(xì)胞株RAW264.7作為破骨細(xì)胞前體細(xì)胞，使用RANKL誘導(dǎo)前體細(xì)胞分化為破骨樣細(xì)胞，研究NBD多肽在此過(guò)程及骨吸收過(guò)程中所起的作用。實(shí)驗(yàn)分為三個(gè)組:溶劑(DMSO)對(duì)照組、NBD1(NBD多肽濃度10uM)組和NBD2(NBD多肽濃度20uM)組。檢測(cè)方法包括:1.用比色法檢測(cè)抗

2、酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)活性;2.用TRAP染色法觀察并計(jì)數(shù)TRAP+多核細(xì)胞(TRAP+MNCs);3.用實(shí)時(shí)熒光定量PCR(RT-PCR)檢測(cè)破骨細(xì)胞相關(guān)基因(TRAP基因、組織蛋白酶K基因、降鈣素受體基因)的表達(dá)水平;4.用AlamarBlue細(xì)胞活性試劑檢測(cè)RAW264.7增殖及活性;5.用掃描電子顯微鏡觀察牛股骨磨片表面的破骨細(xì)胞骨吸收陷窩。
　　結(jié)果:NBD1和NBD2組與溶劑(DMSO)對(duì)照組相比，TRAP活性下

3、降均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，TRAP活性相對(duì)值分別為0.77±0.069(NBD1)，0.68±0.104(NBD2);DMSO對(duì)照組、NBD1和NBD2組中TRAP+MNCs數(shù)目分別是235.67±12.66，192±10.58，169±8.54，兩個(gè)實(shí)驗(yàn)組較對(duì)照組變化具有顯著性差異。破骨相關(guān)基因檢測(cè)結(jié)果顯示，兩個(gè)實(shí)驗(yàn)組trap基因表達(dá)較對(duì)照組均有降低且具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，分別為對(duì)照組表達(dá)水平的0.844±0.057(NBD1)和0.789±0.0

4、22(NBD2)。實(shí)驗(yàn)組的cathepsinK基因表達(dá)水平較對(duì)照組分別為0.907±0.039(NBD1)和0.854±0.041(NBD2)，相對(duì)表達(dá)量均有降低且具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。calcitoninreceptor基因表達(dá)水平較對(duì)照組上升，分別為1.322±0.187(NBD1)，1.498±0.128(NBD2)，NBD1組沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（p＞0.05），NBD2組和對(duì)照組相比，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。增殖檢測(cè)結(jié)果為實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組之間R