ZBTB1互作蛋白的篩選及RTN4基因3’-UTR插入-缺失多態(tài)性與肺癌易感性研究.pdf

1、ZBTB蛋白家族是一類含有BTB/POZ結(jié)構(gòu)域和C2H2 Küppel鋅指基序的DNA結(jié)合蛋白，具有基因轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)功能，在細(xì)胞增殖、分化、凋亡和功能調(diào)節(jié)等生物學(xué)過程中發(fā)揮重要作用。本實(shí)驗(yàn)室通過RT-PCR技術(shù)克隆獲得了一個(gè)ZBTB家族成員ZBTB1（NM_001123329.1）。實(shí)驗(yàn)室前期研究表明ZBTB1位于14號(hào)染色體上，定位在14q23.3，含有2142bp的開放式閱讀框，編碼一個(gè)713個(gè)氨基酸組成的蛋白質(zhì)。同源性分析顯示，ZBT

2、B1的N端BTB/POZ結(jié)構(gòu)域和C端C2H2型ZNF結(jié)構(gòu)域與其他鋅指蛋白家族成員有較高的同源性。亞細(xì)胞定位分析顯示ZBTB1定位于細(xì)胞核，且呈斑點(diǎn)狀分布。
　　蛋白質(zhì)間的相互作用存在于機(jī)體每個(gè)細(xì)胞的生命活動(dòng)中，絕大多數(shù)生命活動(dòng)都是通過蛋白間的相互作用來實(shí)現(xiàn)的。對(duì)生命活動(dòng)中的蛋白質(zhì)間相互作用的研究有助于我們解決許多生命研究中的關(guān)鍵問題。我們通過酵母雙雜交技術(shù)（yeast two hybrid）從人胎腦文庫中篩選與 ZBTB1相互作用

3、的蛋白質(zhì)，經(jīng)測(cè)序整理后獲得了23種與ZBTB1存在互作的新蛋白，并對(duì)其中一種蛋白MAPT進(jìn)行了后續(xù)驗(yàn)證研究。
　　我們成功的構(gòu)建出了pCMV-HA-ZBTB1、pCMV-Myc-MAPT重組載體，并在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中有效表達(dá)。經(jīng)過免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，在293T細(xì)胞中ZBTB1和MAPT存在蛋白間的相互作用。我們的實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證了兩種蛋白的互作。
　　同時(shí)，基于實(shí)驗(yàn)室的另一個(gè)研究方向，我們進(jìn)行病例-對(duì)照研究分析了基因組中相關(guān)基因的插入

4、缺失多態(tài)性與疾病的相關(guān)性。通過閱讀文獻(xiàn)，我們選取RTN4基因上CAA（rs34917480）插入/缺失多態(tài)性與肺癌的易感性進(jìn)行了研究。CAA插入/缺失多態(tài)性位點(diǎn)位于RTN4基因的3’端非編碼區(qū)域。為了研究此多態(tài)性與肺癌易感性的關(guān)系，我們收集了411例肺癌患者血液樣本和478例正常人血液樣本進(jìn)行研究。所有樣本經(jīng)過PCR-聚丙烯酰胺凝膠電泳后統(tǒng)計(jì)基因分型。經(jīng)過統(tǒng)計(jì)學(xué)分析顯示 CAA插入/缺失多態(tài)性在兩組樣本中具有顯著差異（OR=1.375,