蘿卜春化過程中的生理生化變化及開花基因LFY的克隆.pdf

1、中國蘿卜(Raphanus sativus L.var.longgpinnatus Bailey)是原產(chǎn)于中國的一種重要蔬菜，我國蘿卜種植面積在120萬ha左右，位居各種蔬菜種植面積的前三位。目前，限制蘿卜周年生產(chǎn)和均衡供應(yīng)的瓶頸問題是缺乏耐抽薹蘿卜種質(zhì)，這也是生產(chǎn)中經(jīng)常出現(xiàn)先期抽薹而造成重大損失的根本原因。因此，探明蘿卜耐抽薹機(jī)制，將分子育種技術(shù)與傳統(tǒng)育種技術(shù)有機(jī)的結(jié)合起來，創(chuàng)新蘿卜耐抽薹種質(zhì)，對(duì)加速我國蘿卜育種進(jìn)程具有重要理論和實(shí)踐

2、意義。本試驗(yàn)研究了蘿卜春化過程中生長(zhǎng)點(diǎn)的生理生化變化、蘿卜高效遺傳轉(zhuǎn)化體系的建立，并克隆了開花關(guān)鍵基因LFY。主要試驗(yàn)結(jié)果如下： (1)低溫處理過程中，抽薹性差異較大的兩個(gè)品種短葉十三和長(zhǎng)春大型可溶性蛋白、游離氨基酸、可溶性糖含量變化趨勢(shì)基本一致?？扇苄缘鞍住⒂坞x氨基酸含量總體表現(xiàn)為逐漸升高的趨勢(shì)，而可溶性糖含量則呈下降趨勢(shì)。耐抽薹的蘿卜品種長(zhǎng)春大型，其可溶性蛋白和可溶性糖含量明顯低于短葉十三，游離氨基酸含量則相反。兩品種赤霉素

3、(GAs)、生長(zhǎng)素(IAA)的含量在花芽分化開始時(shí)均有較明顯的峰值，在處理后期又出現(xiàn)另一明顯峰值。 (2)通過對(duì)影響轉(zhuǎn)化效果的諸因素的研究，初步篩選出適宜蘿卜品種短葉十三真空滲入的遺傳轉(zhuǎn)化體系：真空滲入時(shí)間為104pa負(fù)壓條件下連續(xù)處理10 min，菌液濃度OD600為0.8～1.2，滲入培養(yǎng)基為1/2MS無機(jī)+B5有機(jī)+6-BA 0.04 mg·L-1+AS 19.6 mg·L-1，在蕾期對(duì)花蕾進(jìn)行真空滲入。 (3)以

4、蘿卜品種短葉十三的花蕾為材料，通過RT-PCR的方法，克隆了開花關(guān)鍵基因LFY部分cDNA序列，和已公布的大白菜LFY基因具有93％以上的同源性，將此序列以相反方向先插入到分子量較小(2686 bp)的中間載體pUC19上，并在兩片段之間插入小麥乙酞輔酶A的第20個(gè)內(nèi)含子，再將連接好的三個(gè)片段酶切后插入到植物表達(dá)載體pROK2 35S啟動(dòng)子之后，從而構(gòu)建了雙元dsRNA抑制載體，并通過真空滲入遺傳轉(zhuǎn)化法轉(zhuǎn)入到弱冬性蘿卜短葉十三試材中。