人TNF-α嵌合抗體體外親和力成熟作用研究.pdf

1、該論文的創(chuàng)新點:通過不同試驗方法體外獲得親和力提高的新型抗人TNF-α嵌合抗體,并保持抗體的中和功能不變;建立基于抗原抗體相互識別的立體結構信息預測判斷抗體親和力及抗原識別位點的新方法;嘗試在計算機模建基礎上,通過定點突變進一步提高抗體親和力.人腫瘤壞死因子α(hTNFα)是一種由單核、巨噬、T淋巴、中性粒、肥大或內皮細胞分泌產生的細胞因子,可介導多種生物學活性.當hTNF-α在體內的大量產生和釋放可引起機體免疫平衡失調,并可與其它炎癥

2、因子一起產生多種病理損傷.該研究組于上世紀八十年代已經制備得到抗hTNFα鼠源單克隆抗體(McAb)Z12,具有中和hTNFα細胞毒性功能,其親和力在K<,a>=8×10<'7>L/mol.在其人源化過程中,抗體的親和力有顯著地降低.該課題借助鏈替換(Chain Shuffling)方法,以鼠源抗體Z12為母本,通過噬菌體抗體庫技術親和篩選,借助計算機合理設計獲得高親和力嵌合抗體CH22,以期達到在保持抗體中和活性的同時顯著提高抗體親和

3、力的目的.同時借助計算機模建得到的抗原(hTNF-α)與抗體(CH22)相互作用的立體結構信息,通過點突變得到新的人源化抗體,進一步提高抗體親和力和抗體中和活性.通過以上研究,獲得抗hTNF-α高親和力嵌合抗體,與Z12比較親和力最高提高750倍,比Remicade(R)親和力提高6倍;其識別hTNF-α功能表位不同于Remicade(R),但中和hTNF-α活性能力與Remicade(R)相同.嵌合抗體CH22與已公開發(fā)表的抗體均有所