游離鈣信號(hào)通路介導(dǎo)二烯丙基三硫誘導(dǎo)人胃癌MGC-803細(xì)胞凋亡.pdf

1、目的：研究二烯丙基三硫(diallyltrisulfide,DATS)抑制人胃癌MGC-803細(xì)胞增殖，誘導(dǎo)其凋亡的作用及游離鈣(freecalcium，Ca2+)、活性氧(reactiveoxygenspecies，ROS)、Caspase-3的變化與DATS誘導(dǎo)人胃癌MGC-803細(xì)胞凋亡的關(guān)系。 方法：采用倒置顯微鏡、光鏡、MTT法、流式細(xì)胞術(shù)及Westernblot等方法，觀察DATS對(duì)體外培養(yǎng)的MGC-803細(xì)胞生長抑

2、制作用，細(xì)胞周期分布和凋亡的影響以及細(xì)胞內(nèi)Ca2+、ROS、Caspase-3的變化。結(jié)果：MTT顯示，4、8、12、16、24mg·L-1DATS處理人胃癌MGC-803細(xì)胞72h，細(xì)胞生長抑制率分別為0.231±0.037，0.305±0.036，0.455±0.029，0.607±0.058，0.751±0.019，表明DATS呈濃度依賴性抑制細(xì)胞增殖(P＜0.05)；光鏡下，DATS作用的胃癌細(xì)胞出現(xiàn)體積縮小，胞漿強(qiáng)嗜酸性，核固

3、縮濃染的凋亡典型形態(tài)學(xué)改變；流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果顯示，4、8、12、16mg·L-1的DATS處理細(xì)胞24h后，凋亡率分別為3.8％、10.6％、23.0％、24.2％，除4mg·L-1組外，其余各組均明顯高于對(duì)照組，表明DATS呈濃度依賴性誘導(dǎo)MGC-803細(xì)胞凋亡(P＜0.01)。4、8、12、16mg·L-1DATS處理細(xì)胞24h后，G1期細(xì)胞數(shù)上升，S期細(xì)胞減少，提示DATS可阻滯MGC-803細(xì)胞于G1期。細(xì)胞內(nèi)鈣離子鰲合劑BAPT

4、A-AM10μmol·L-1、抗氧化劑NAC10mmol·L-1、Caspase-3抑制劑Ac-DEVD-CHO20μmol·L-1預(yù)處理細(xì)胞1h，再加12mg·L-1的DATS處理24h后，凋亡率分別為13.2％、10.5％、5.1％，比單用12mg·L-1的DATS組顯著下降，提示三者具有抑制DATS誘導(dǎo)凋亡的作用(P＜0.01)。4、8、12、16mg·L-1DATS處理MGC-803細(xì)胞4h，F(xiàn)luo3熒光強(qiáng)度分別為4.0±0.

5、5、8.8±0.3、15.4±0.4、16.0±0.5，除4mg·L-1組外，其余各組均高于對(duì)照組3.6±0.1，表明DATS呈濃度依賴性促進(jìn)細(xì)胞內(nèi)Ca2+水平升高(P＜0.01)。4、8、12、16mg·L-1DATS處理細(xì)胞5h，DCFH-DA熒光強(qiáng)度分別為11.00±1.18、25.40±1.73、45.87±2.12、56.87±1.57，除4mg·L-1組外，其余各組均明顯高于對(duì)照組8.40±0.90(P＜0.01)。BAPT

6、A-AM+DATS組熒光強(qiáng)度為13.47±0.95，與單用DATS組比較，具有明顯差異(P＜0.01)；Ac-DEVD-CHO+DATS組熒光強(qiáng)度與單用DATS組比較，無顯著性差異(P＞0.05)，表明DATS以濃度依賴促進(jìn)細(xì)胞內(nèi)ROS水平的升高，細(xì)胞內(nèi)鈣離子鰲合劑能抑制細(xì)胞內(nèi)ROS水平的升高，而Caspase-3抑制劑則不能阻斷ROS水平的升高?！　?2mg·L-1DATS處理MGC-803細(xì)胞4h、8h、12h、24h后，活化的C

7、aspase-3的表達(dá)率分別為3％、7.27％、14.39％、27.65％，表明DATS以時(shí)間依賴性促進(jìn)活化的Caspase-3的表達(dá)(P＜0.01)。BAPTA-AM+DATS、NAC+DATS處理12h后，活化的Caspase-3的表達(dá)率分別為6％、5.71％，與DATS組有顯著性差異(P＜0.01)，提示細(xì)胞內(nèi)鈣離子鰲合劑和抗氧化劑能抑制Caspase-3的活化。Westernblot顯示，12、16mg·L-1DATS處理MGC