山東省2型糖尿病全基因組掃描.pdf

1、2型糖尿病是以胰島素抵抗為主伴胰島素分泌不足或者胰島素分泌不足為主伴胰島素抵抗為特點(diǎn)的糖尿病，約占糖尿病總數(shù)的90％，發(fā)病年齡一般在40-60歲左右，肥胖者在青春期也可發(fā)病。 2型糖尿病是一種遺傳與環(huán)境因子相互作用的代謝性疾病，其家族聚集性、同卵雙生子同病率高于異卵雙生子的同病率，以及在某些種族人群中高發(fā)病率提示該病具有明顯的遺傳易感性。除部分亞型外，大多數(shù)晚發(fā)型2型糖尿病屬于多基因遺傳病，不遵循經(jīng)典的孟德?tīng)栠z傳規(guī)律，以基因之間

2、、基因與環(huán)境之間的交互作用為特征。 隨著分子遺傳學(xué)技術(shù)的發(fā)展，現(xiàn)在的2型糖尿病遺傳學(xué)研究日趨集中于致病基因的定位克隆及基因的表達(dá)與功能研究。對(duì)于2型糖尿病這種復(fù)雜性多基因遺傳性疾病的分子遺傳學(xué)研究目前主要基于兩種策略，即全基因組掃描與候選基因篩查。雖然國(guó)際上已研究過(guò)近250多個(gè)候選基因，但均不具有普遍性，因而采用微衛(wèi)星標(biāo)記技術(shù)進(jìn)行全基因組掃描，對(duì)易感基因定位的方法成為主流。本研究采用了1997年Barcellos等提出的DNA混

3、合池全基因組掃描關(guān)聯(lián)分析方法，完成了對(duì)山東省漢族人群中284例有家族史的2型糖尿病患者及1000例正常對(duì)照者的全基因組掃描關(guān)聯(lián)分析研究，發(fā)現(xiàn)了44個(gè)關(guān)聯(lián)位點(diǎn)，為進(jìn)一步篩查易感基因提供了依據(jù)。 目的: 用DNA混合池（DNA pooling）方法，通過(guò)覆蓋全基因組的400個(gè)微衛(wèi)星遺傳標(biāo)記（STR）對(duì)山東省漢族人群有家族史的2型糖尿病患者及正常對(duì)照者進(jìn)行基因組掃描，尋找2型糖尿病的遺傳位點(diǎn)，定位致病基因。 方法:

4、 1．按照世界衛(wèi)生組織（WHO）對(duì)糖尿病的診斷標(biāo)準(zhǔn)，從山東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院所屬的山東省內(nèi)分泌與代謝病研究所就診的1600名漢族2型糖尿病患者中篩選出284例有家族史的患者284例，組成患者組。其中男性170例，女性114例，年齡范圍12-83歲，平均年齡（48．85±9．13）歲。對(duì)照組來(lái)自山東省血液中心獻(xiàn)血者，共1000例，其中男性550例，女性450例。年齡范圍17-87歲，平均年齡（34．69±4．45）歲?；颊呓M男女之比為1．4

5、9：1，對(duì)照組男女之比為1．22：1。 2．用改進(jìn)的酚-氯仿法提取基因組DNA，測(cè)定DNA濃度后，稀釋到20 ng/μl，在上述稀釋好的DNA樣品中每份各取10ul混合在同一管內(nèi)，作為一個(gè)DNA池，分別構(gòu)建了患者組和對(duì)照組兩個(gè)混合池。 3．以平均間隔10 cM（厘摩）的遺傳距離選擇了400個(gè)微衛(wèi)星遺傳標(biāo)記（ABI PRISMTM Linkage Mapping Kit，Version2．5），對(duì)284例家族史陽(yáng)性的2型糖

6、尿病患者與1000例正常對(duì)照者組成的DNA混合池樣本分別進(jìn)行DNA擴(kuò)增，然后在3130（Applied Biosystem，ABI）毛細(xì)管遺傳分析儀上進(jìn)行基因掃描，用Genemapper4．0軟件進(jìn)行基因分型。 4．統(tǒng)計(jì)學(xué)分析采用每個(gè)等位基因的峰高與該位點(diǎn)所有等位基因峰高的總和之比的計(jì)算方法，算出每個(gè)等位基因所占所有等位基因的比率，然后換算成基因頻率，再采用Clump2．3軟件對(duì)患者組和對(duì)照組每個(gè)位點(diǎn)上的等位基因的頻率進(jìn)行比較，

7、計(jì)算其差異有無(wú)顯著性，以P<0．01作為有顯著性差異的標(biāo)準(zhǔn)，確定關(guān)聯(lián)遺傳位點(diǎn)。 結(jié)果: 經(jīng)過(guò)反復(fù)試驗(yàn)，在所有常染色體和X染色體上最終獲得了所有400個(gè)遺傳標(biāo)記的基因分型結(jié)果，其中397個(gè)位點(diǎn)呈現(xiàn)多態(tài)性；D1S425、D12S310、D18S464這3個(gè)位點(diǎn)等位基因只有一種類型，無(wú)多態(tài)性。經(jīng)過(guò)CLUMP2．3軟件統(tǒng)計(jì)分析，除14、15號(hào)染色體之外，其余染色體上共發(fā)現(xiàn)44個(gè)遺傳位點(diǎn)的等位基因頻率統(tǒng)計(jì)學(xué)差異在患者組和對(duì)照組有顯