氫氣飽和生理鹽水對大鼠膽管缺血再灌注損傷的保護作用及機制.pdf

1、目的:本實驗通過建立大鼠肝內(nèi)膽管缺血再灌注損傷(IR)動物模型，探討靜脈注射氫氣飽和生理鹽水是否對大鼠肝內(nèi)膽管缺血再灌注損傷具有保護作用，觀察其病理學改變，并從膽管上皮細胞Bcl-2/Fas基因表達、凋亡等方面探討氫氣飽和生理鹽水可能的作用機制。
　　方法:將32只雄性SD大鼠隨機分成4組:假手術(shù)組（SO組），缺血再灌注組（IR組），缺血再灌注+生理鹽水組（IR+NS組），缺血再灌注+氫氣飽和生理鹽水組（IR+HS組），每各8只。

2、用1％戊巴比妥鈉以每100g體重0.6ml的劑量注射進入腹腔，等待麻醉藥物效果顯效后，用碘伏對大鼠的腹部進行消毒，然后沿著大鼠的腹正中線打開腹部，分離至膽總管及十二指腸，并于二者匯合處經(jīng)十二指腸外用硬膜外導管逆行置管于膽總管內(nèi)，固定并引流膽汁;分離肝門部，用無創(chuàng)血管夾夾閉肝左、中葉血管（包括動、靜脈和膽管），阻斷血流，并保持肝右、尾狀葉血流通暢，按規(guī)定時間撤夾，恢復血供，從而制成70％肝缺血再灌注損傷模型。各組SD大鼠均于缺血60min

3、，經(jīng)尾靜脈注射氫氣飽和生理鹽水，再灌注120min后統(tǒng)一取左肝組織并收集膽汁（均為I/R前后兩組）。肝組織分別用10％甲醛固定和凍存在-80℃冰箱內(nèi)，HE染色后光鏡病理學觀察，觀察肝組織和肝內(nèi)膽管上皮細胞的病理形態(tài)變化;采用免疫組織化學法（PV二步法）觀察肝組織中Bcl-2/Fas蛋白在肝內(nèi)膽管上皮細胞的表達情況;Tunel法檢測細胞凋亡情況;分光光度法檢測丙二醛(malOndialdehyde，MDA)和谷胱甘肽(glutathion

4、e， GSH)胡含量，超氧化物歧化酶(superoxidedismutase，SOD)和過氧化氫酶(catalase，CAT)的活力。將上面所有得到的數(shù)據(jù)用均數(shù)±標準差((x)±s)表示，采用方差分析對樣本均數(shù)進行比較;采用snk法對兩兩進行比較，使用SPSS17.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計學處理;統(tǒng)計檢驗P＜0.05被認為差異具有統(tǒng)計學意義。
　　結(jié)果:假手術(shù)組（SO組），缺血再灌注組（IR組），缺血再灌注+生理鹽水組（IR+NS組）相

5、比較，術(shù)后缺血再灌注+富氫水組（IR+HS組）的肝組織病理情況有所改善;膽汁中葡萄糖(Glu)的含量在IR前后升高的幅度明顯降低（IR后值均大于IR前值）;膽汁中γ-谷酰轉(zhuǎn)移酶(GGT)的活性在IR前后升高的幅度明顯明顯降低（IR后值均大于IR前值）;IR組、IR+NS組、IR+HS組動物于建模術(shù)后肝組織內(nèi)MDA含量明顯升高，GSH含量降低，SOD活力和CAT活力下降;與IR+NS組相比較，IR+HS組術(shù)后肝組織內(nèi)MDA含量升高較少(P

6、＜0.01)，GSH含量下降程度降低(P＜0.01)，SOD活力和CAT活力下降程度也降低(P＜0.01)。免疫組化法測bcl-2基因和Fas基因的表達，IR+HS組肝內(nèi)膽管上皮細胞陽性細胞數(shù)明顯比IR+NS組減少。Tunel檢測肝內(nèi)膽管上皮細胞凋亡，IR+HS組肝內(nèi)膽管上皮細胞凋亡明顯比IR+NS組減輕。
　　結(jié)論:氫氣飽和生理鹽水可以減輕肝缺血再灌注后肝內(nèi)膽道損傷，可以抑制肝臟缺血再灌注損傷所引發(fā)的氧化應(yīng)激反應(yīng)，減輕氧化損傷，