細胞骨架蛋白Mena和整合素α9在肝細胞癌轉(zhuǎn)移中的作用及機制研究.pdf

1、本課題分為兩部分，涉及兩個在肝細胞癌（以下簡稱肝癌）中尚未研究的基因，哺乳動物 ENA(Mammalian enabled homolog，MENA)和整合素α9（Integrinα9，ITGA9），分別對它們在肝癌轉(zhuǎn)移中的功能和相關(guān)機制進行研究。
　　第一部分、探討微絲調(diào)節(jié)蛋白Mena在肝癌轉(zhuǎn)移中的作用。目前細胞骨架相關(guān)蛋白在腫瘤發(fā)生發(fā)展中作用機制的研究主要是微管及其相關(guān)蛋白，而微絲系統(tǒng)在腫瘤學(xué)領(lǐng)域的研究還處于早期階段。我們通過

2、體內(nèi)和體外實驗觀察了微絲調(diào)節(jié)蛋白Mena在肝癌細胞轉(zhuǎn)移中的作用，并對相關(guān)信號通路進行了初步探索。首先，我們通過Real-time PCR與組織芯片技術(shù)檢測了MENA在肝癌細胞和組織中的表達，研究結(jié)果表明，腫瘤組織芯片中Mena蛋白表達與癌栓形成、腫瘤多樣性、微血管侵襲和肝癌TNM分期正相關(guān)；通過慢病毒感染的方法得到MENA干擾肝癌細胞株，并對它們進行了遷移、侵襲、凋亡、細胞免疫熒光等一系列細胞生物學(xué)實驗，在細胞水平觀察MENA對肝癌侵襲

3、轉(zhuǎn)移的影響及分子機制,結(jié)果顯示MENA干擾能抑制肝癌細胞遷移和侵襲，促進其發(fā)生失巢凋亡，促進細胞骨架合成以及黏著斑和偽足的形成；進一步通過Western Blotting實驗、Pull Down實驗和表達譜芯片技術(shù)觀察了MENA干擾肝癌細胞株在蛋白質(zhì)水平、磷酸化蛋白質(zhì)水平和mRNA水平的變化，認(rèn)為Mena對STAT3、 Erk和RhoA活性的上調(diào)及Cdc42活性的下調(diào)可以部分的解釋MENA對肝癌細胞生存、遷移及侵襲的促進作用；最后進行了

4、體內(nèi)實驗，結(jié)果在裸鼠的肝原位和尾靜脈腫瘤移植模型中，MENA都表現(xiàn)出對肝癌細胞在體內(nèi)轉(zhuǎn)移的促進作用。由此，我們不但通過組織芯片發(fā)現(xiàn)MENA表達與肝癌轉(zhuǎn)移的指標(biāo)正相關(guān)，而且在細胞、分子以及體內(nèi)水平研究了MENA如何促進肝癌轉(zhuǎn)移以及相關(guān)的機理，為進一步探索MENA及微絲系統(tǒng)對肝癌轉(zhuǎn)移的影響提供了依據(jù)。
　　第二部分、主要研究整合素α9（Integrinα9，ITGA9）在肝癌發(fā)展轉(zhuǎn)移中的作用。整合素是一類細胞表面的糖蛋白受體，該家族介

5、導(dǎo)機械信號與生化分子信號之間的轉(zhuǎn)化，與腫瘤細胞在腫瘤微環(huán)境中的黏附和運動密切相關(guān)，同時也對細胞骨架起調(diào)節(jié)作用。通過細胞增殖、侵襲和失巢凋亡實驗，我們發(fā)現(xiàn)ITGA9過表達后能夠抑制肝癌細胞增殖和侵襲，促進肝癌細胞失巢凋亡。在此基礎(chǔ)上，我們用裸鼠皮下、肝原位和尾靜脈腫瘤移植模型驗證了ITGA9能抑制肝癌細胞成瘤和生長，抑制在原發(fā)灶附近的轉(zhuǎn)移以及在遠端的轉(zhuǎn)移。為了進一步研究相關(guān)分子機制，我們通過酵母雙雜交技術(shù)篩選到與ITGA9相互作用的蛋白R