含EAB基團的兩親接枝聚膦腈載藥自組裝體的構建及抗腫瘤作用評價.pdf

1、納米技術的迅速發(fā)展極大地推動了納米載藥系統(tǒng)在癌癥治療中的應用。近年來，一類被稱為聚合物囊泡的新穎納米自組裝體吸引了人們的注意。相較于自組裝膠束僅能裝載疏水性藥物，聚合物囊泡以類似脂質(zhì)體的結構特點，不僅能裝載疏水性藥物也能裝載親水性藥物，甚至能共載親疏水性兩種藥物，極具開發(fā)潛力。本文選取聚膦腈作為聚合物主鏈，以分子量2000的聚乙二醇單甲醚（mPEG）為親水性側(cè)鏈和對氨基苯甲酸乙酯(EAB)為疏水性側(cè)基進行修飾，通過mPEG/EAB投料比

2、調(diào)節(jié)，合成一系列PEG接枝率不同的兩親性接枝聚膦腈(PEP)，又對聚合物結構進行核磁共振(NMR)、傅里葉紅外光譜(FT-IR)和凝膠滲透色譜(GPC)表征。采用普通透析法即可簡便制得該系列聚合物的納米自組裝體。通過TEM和cryo-TEM觀察，PEG接枝率為0.89形成膠束，0.86形成過渡態(tài)，0.79至0.67形成囊泡。
　　為考察PEP裝載親疏水性藥物的能力，本文分別以水溶性化療藥物鹽酸阿霉素(DOX·HCl)及其脫鹽產(chǎn)物疏

3、水性阿霉素(DOX)作為模型藥物，采用透析法裝載，結果表明聚合物中疏水基團EAB接枝率上升將促進PEP的藥物裝載。尤其，PEP-5裝載DOX·HCl或DOX均能獲得高載藥量(LC)和包封率(EE)。其中，載DOX·HCl的PEP-5系統(tǒng)(PEP-5-DH) LC為16.23％，載DOX的PEP-5系統(tǒng)(PEP-5-D)LC為15.55％，兩者對應EE均高于90％，PEP-5-DH為97.30％，PEP-5-D為93.30％。經(jīng)2D1H-

4、1H NOESY檢測，證明載體與藥物間存在極強分子間作用力，有利于載藥。藥物釋放實驗表明，DOX·HCl從PEP載藥系統(tǒng)的釋放較DOX快，且與pH條件有關。MCF-7細胞毒性實驗發(fā)現(xiàn)，載體本身幾乎無毒。PEP-5-DH與游離DOX·HCl毒性相近，而PEP-5-D，由于藥物水溶性不佳釋放緩慢，導致細胞毒性減弱。由PEG修飾形成的納米自組裝體被廣泛報道具有增強滲透與滯留(EPR)效應相關的腫瘤被動靶向性，能降低化療藥物毒副作用，因此本課題

5、構建了MCF-7乳腺癌荷瘤裸鼠模型，對PEP載藥系統(tǒng)進行體內(nèi)評價。結果表明，PEP載體、藥物親水性及給藥方案均對藥效產(chǎn)生不同影響。實驗過程中，PEP載藥的劑型相比游離DOX·HCl毒性明顯減小。藥效方面，雖然2 mg/kg每天1次連續(xù)3天方式的給藥總量比5 mg/kg每3天給1次共3次的方式更低，但2 mg/kg對應組的療效更佳。采用相同的給藥方式，PEP-5-DH的抑瘤效果明顯優(yōu)于PEP-5-D，已與游離DOX·HCl相當，但安全性卻

6、較游離DOX·HCl顯著提高，達到了降低化療藥物毒副作用的同時，不犧牲藥物療效的目的。
　　為克服MCF-7/Adr腫瘤細胞對阿霉素的耐藥性，本文還利用PEP自組裝囊泡的獨特結構共載DOX·HCl或DOX和氯喹(CQ)。CQ為一種傳統(tǒng)抗瘧藥物，但也被報道具有抗腫瘤藥物增敏作用，已在臨床試驗中進行研究。與之相關的機制可能是抑制耐藥蛋白的外排，也可能與促癌干細胞(CSC)凋亡相關。細胞毒性實驗發(fā)現(xiàn)阿霉素和CQ聯(lián)合用藥可顯著逆轉(zhuǎn)耐藥，通

7、過Chou-Talalay聯(lián)合指數(shù)法計算證實兩者具有協(xié)同作用且隨CQ比例的增加而增強。為了更好的地模擬體內(nèi)環(huán)境，本文構建了耐藥性MCF-7/Adr細胞3D腫瘤球模型，并采用激光共聚焦(CLSM)斷層掃描及掃描電鏡(SEM)對各試驗組的腫瘤球內(nèi)滲透劑抑瘤效果進行評價。相比游離DOX·HCl只能停留在腫瘤球表面，CQ和DOX·HCl聯(lián)合用藥能更好地滲透進入腫瘤深部，滲透效果最好的是按DOX·HCl和CQ以1∶1比例共載的PEP制劑(PEP-