類受體激酶StLRPK1參與的抗病信號(hào)途經(jīng)分析.pdf

1、馬鈴薯（Solanum tuberosum L.）是世界第四大糧食作物。晚疫病是馬鈴薯生產(chǎn)中面臨的最大威脅，病害爆發(fā)導(dǎo)致大規(guī)模減產(chǎn)。前期研究中克隆到一個(gè)類受體激酶基因StLRPK1，初步研究表明StLRPK1對(duì)馬鈴薯晚疫病具有廣譜抗性。本研究以超量表達(dá)StLRPK1的轉(zhuǎn)基因本氏煙草為材料，進(jìn)一步研究StLRPK1在晚疫病抗性中的作用，探究StLRPK1介導(dǎo)的抗病信號(hào)傳遞途徑，解析StLRPK1的抗病機(jī)制。主要結(jié)果如下:
　　1.利

2、用卡那霉素抗性篩選方法篩選得到超量表達(dá)StLRPK1的純合本氏煙草株系。純合株系接種晚疫病原菌小種88069進(jìn)行抗性鑒定，結(jié)果表明StLRPK1超量株系晚疫病抗性顯著高于對(duì)照。
　　2.利用qRT-PCR分析了超量表達(dá)StLRPK1本氏煙草株系接種前后PTI marker基因表達(dá)。未接種晚疫病菌時(shí)，與野生型相比，超量株系中PTI相關(guān)marker基因呈上調(diào)表達(dá)趨勢(shì);病原菌誘導(dǎo)24 h表達(dá)分析顯示，在超量株系中多個(gè)PTI抗性相關(guān)基因更

3、大幅度上調(diào)表達(dá)，證明StLRPK1可以通過調(diào)控下游PTI抗性相關(guān)基因的表達(dá)來提高對(duì)晚疫病的抗性。
　　3.利用VIGS系統(tǒng)探索了StLRPK1參與的信號(hào)途徑。結(jié)果顯示VIGS沉默NbSIPK后野生型和超量株系出現(xiàn)相同程度抗性下降，說明NbSIPK不參與StLRPK1介導(dǎo)的抗性，VIGS沉默Nb WIP后超量株系抗性下降程度顯著高于野生型，表明StLRPK1可能通過NbWIPK傳遞抗病信號(hào)。
　　4.利用煙草葉片瞬時(shí)表達(dá)體系對(duì)

4、StLRPK1進(jìn)行亞細(xì)胞定位，結(jié)果顯示StLRPK1定位于細(xì)胞膜上。
　　5.用StLRPK1激酶域構(gòu)建酵母雙雜交誘餌載體，篩選馬鈴薯-病原菌互作蛋白cDNA文庫，沒有篩選到互作蛋白，在StLRPK1與StBAK1的點(diǎn)對(duì)點(diǎn)雜交實(shí)驗(yàn)中沒有檢測(cè)到互作。
　　6.轉(zhuǎn)錄組分析表明，干涉StLRPK1的馬鈴薯株系與對(duì)照E3相比，多個(gè)蛋白激酶組成型下調(diào)表達(dá)，誘導(dǎo)24 h后，更多激酶相對(duì)下調(diào)表達(dá)的同時(shí)大量轉(zhuǎn)錄因子下調(diào)表達(dá)。StLRPK1可