超聲對鼻咽癌細胞株拓撲替康熱化療作用影響的體外實驗研究.pdf

1、目的：以人鼻咽癌低分化細胞株(CNE-2)為對象，觀察超聲對拓撲替康(TopotecanTPT)熱化療作用的影響． 方法： 1．以體外培養(yǎng)鼻咽癌細胞株為靶細胞，接種于96孔培養(yǎng)板，以未加藥的細胞作為陰性對照，以不含細胞的RPMI-1640培養(yǎng)液為空白對照，培養(yǎng)2小時貼壁。再加入不同濃度Topotecan，分別為0.1μg/ml、0.2g/ml、0.3g/ml、0.4μg/ml、0.5μg/ml，藥物作用1小時后，用Han

2、k’s液洗滌2次后加入等量RPMI-1640培養(yǎng)液再培養(yǎng)48小時。用WST-1法酶標儀測得波長在450nm的各濃度的吸光度值(OD值)，計算出Topotecan對細胞株的抑制率，再通過相應濃度的抑制率，使用直線回歸方程計算得到Topotecan的半數(shù)抑制濃度(IC50)。重復三次實驗，取三次實驗的平均值。 2．再使用所測得的IC50值的20％為藥物濃度，采用恒溫水浴加溫法進行熱化療研究。實驗分為Topotecan組、超聲作用組、

3、單純熱療組、熱療+Topotecan組、超聲+Topotecan組、超聲+熱療+Topotecan組、空白對照組，超聲使用1MHz和3MHz兩種頻率，處理完成后(藥物作用90分鐘)用Hank’s液洗滌2次再用RPMI-1640培養(yǎng)液洗滌1次，加入等量RPMI-1640培養(yǎng)液配成細胞懸液接種于96孔培養(yǎng)板培養(yǎng)48小時，用WST-1法在酶標儀上測得波長450 nm處的吸光度值，再計算得到不同組的生長抑制率(Growth inhibition

4、 ratio GIR)。重復三次實驗，取平均值。使用SPSS軟件方差分析對實驗數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析；3．選取對照組、單純超聲組、Topotecan組、熱療+Topotecan組、超聲+Topotecan組、超聲+熱療+Topotecan組細胞離心后用戊二醛固定送電鏡觀察細胞亞細結構變化。 結果： 1．三次重復實驗，得到Topotecan對鼻咽癌細胞株的半數(shù)抑制濃度(IC50)為0.396μg/ml； 2．Topote

5、can組、熱療+Topotecan組、單純熱療組、超聲+熱療+Topotecan組(3MHz)、超聲治療組(3MHz)、超聲治療組(1MHz)、超聲+Topotecan組(1MHz)、超聲+Topotecan組(3MHz)、超聲+熱療+Topotecan組(1MHz)的生長抑制率分別為：24.78％、40.69％、30.23％、47.52％、10.65％、15.11％、38.37％、31.48％、 60.32％，各組間進行完全隨機的方差

6、分析，進行方差齊性檢驗P>0.05，說明方差齊性，組間比較采用LSD法。依據(jù)生長抑制率結果可以看出超聲聯(lián)合Topotecan組效果強于Topotecan組，P<0.01差異具有顯著統(tǒng)計學意義；超聲聯(lián)合熱化療組效果均強于熱化療組，P<0.01．差異具有顯著統(tǒng)計學意義；兩種頻率超聲之間比較，不論是與藥物還是與熱化療聯(lián)合，1MHz的效應要優(yōu)于3MHz，組間比較P<0.01差異具有顯著統(tǒng)計學意義； 3．電鏡結果顯示：對照組細胞主要表現(xiàn)為

7、核大，核仁清楚，胞質中線粒體及內質網(wǎng)結構清楚，少量細胞可見雙核；單純超聲組細胞表現(xiàn)為核/質比較正常有所減小，核膜、核仁清楚，胞質中線粒體及內質網(wǎng)結構欠清晰，電子密度較對照組顯低；單純藥物組細胞核/質比明顯減小，核中異染色質出現(xiàn)，線粒體有減少趨勢；單純熱療組細胞核/質比減小，染色質出現(xiàn)固縮，細胞核中有異染色質出現(xiàn)，少量細胞出現(xiàn)水腫；熱療+TPT組細胞主要表現(xiàn)為核中異染色質明顯增多，線粒體有減少趨勢，粗面內質網(wǎng)增多，少量細胞水腫；超聲(1M

8、Hz)+TPT組細胞主要以水腫破壞為主，胞質中髓樣改變明顯，部分細胞染色質固縮邊集；超聲(3MHz)+TPT表現(xiàn)為少量細胞水腫，．胞核中染色質固縮，有異染色質和髓樣結構出現(xiàn)；超聲+熱化療組細胞損傷嚴重，出現(xiàn)大量的凋亡壞死細胞，細胞核裂解，髓樣改變多見； 結論： 1．超聲對Topotecan有增效作用； 2．超聲對Topotecan的熱化療效應有明顯的增強作用； 3．超聲對Topotecan以及Topote